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粮油中黄曲霉毒素B1的快速测定便携式液相色谱法

1范围

本标准规定了采用便携式液相色谱法测定粮油中黄曲霉毒素B1（AFTB1）的原理、试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、测定、结果计算和精密度等内容。

本标准适用于食品（农产品）检测实验室、快检实验室和移动实验室等场所，进行谷物及其制品、豆类及其制品、坚果及籽类、油脂及其制品中AFTB1的快速测定，检出阳性的样品采用GB5009.22的方法测定进行确认。

本标准AFTB1的检出限为0.03μg/kg，AFTB1的定量限为0.1μg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本标准的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本标准，凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用本标准。

GB5009.22食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定

GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

用乙腈-水溶液提取试样中的黄曲霉毒素B1，免疫磁珠法或固相净化柱法净化，液相色谱分离，柱后衍生荧光检测，外标法定量。

4试剂和材料

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1试剂

4.1.1乙腈(CH3CN):色谱纯。

4.1.2甲醇(CH3OH)：色谱纯。

4.1.3氯化钠(NaCl)。

4.1.4磷酸氢二钠(Na2HPO4)。

4.1.5磷酸二氢钾(KH2PO4)。

4.1.6氯化钾(KCl)。

4.1.7盐酸(HCl)。

4.2试剂配制

4.2.1乙腈水溶液（70+30，体积比）：量取70mL乙腈（4.1.1），用水稀释至100mL。

4.2.2磷酸盐缓冲溶液（PBS溶液）：称取8.00g氯化钠（4.1.3）、1.20g磷酸氢二钠（4.1.4）、0.20g磷酸二氢钾（4.1.5）、0.20g氯化钾（4.1.6），用900mL水溶解，用盐酸（4.1.7）调节pH至7.4，用水定容至1000mL。

4.3标准品

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黄曲霉毒素B1标准品（C17H12O6，CAS：1162-65-8）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

4.4标准溶液配制

4.4.1标准储备溶液(10.0μg/mL):准确称取AFTB1（4.3）1mg(精确至0.01mg)，置于100mL容量瓶，用乙腈（4.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为10μg/mL的标准储备液。溶液转移至试剂瓶中后,在-20℃下避光保存,备用。临用前进行浓度校准(校准方法参见GB5009.22附录A)。

4.4.2标准工作液(100ng/mL)：准确移取AFTB1标准储备溶液(4.4.1)1.00mL至100mL容量瓶中,乙腈（4.1.1）定容。此溶液密封后避光-20℃下保存，有效期三个月。

4.4.3标准工作溶液(1ng/mL)：准确移取浓度为100ng/mLAFTB1标准溶液0.50mL于50mL容量瓶中，用流动相定容至刻度。

4.5材料

4.5.1黄曲霉毒素免疫磁珠前处理试剂盒：回收率≥85%。注：对于不同批次的试剂盒在使用前需进行质量验证。

4.5.2黄曲霉毒素快速净化柱：5mL，含有极性、非极性及离子交换等多种类型基团的吸附剂，适用于粮食、食用油样品基质净化的固相净化柱（多功能净化柱）。

4.5.3玻璃纤维滤纸。5仪器和设备

5.1便携式液相色谱仪：便携式液相色谱仪（配备柱后衍生和荧光检测器），或黄曲霉毒素检测仪（配备液相色谱系统和黄曲霉毒素检测器），或液相色谱仪（配备柱后衍生和荧光检测器，在符合分析仪器实验室环境条件下使用）。

5.2分析天平：感量分别为0.01mg和0.01g。

5.3涡旋混合器。

5.4粉碎机。6分析步骤

警示：整个分析操作过程应在指定区域内进行。该区域应具备相对独立的操作台和废弃物存放装置。在实验过程中,操作者在配制AFTB1标准溶液时应按照接触剧毒物的要求采取

相应的保护措施。

6.1试样制备

参考GB/T5491，对于固体样品经粉碎机粉碎。

6.2试样前处理

6.2.1提取

准确称取2.5g（精确到0.01g）样品于50mL离心管中，加入10mL提取液（4.2.1），涡旋提取3min，静止或过滤，上清液（或滤液）用免疫磁珠