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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书
(10)申请公布号CN103343134A
(43)申请公布日2013.10.09
(21)申请号CN201310282127.2
(22)申请日2013.07.05
(71)申请人江苏普罗赛生物技术有限公司
地址213164江苏省常州市武进区常武中路801号常州科教城天润科技大厦D座9楼
(72)发明人江永海朱月珍陆雅臣
(74)专利代理机构
代理人
(51)Int.CI
C12N15/62
C07K19/00
C12N15/79
C12N5/071
A61K38/18
A61K8/64
A61P17/02
A61Q1/00
权利要求说明书说明书幅图
(54)发明名称
EGF-Fc融合蛋白及其哺乳动物表
达体系高表达生产方法
(57)摘要
本发明涉及一种EGF-Fc融合蛋白
及其哺乳动物表达系统高表达的生产方
法，主要通过基因工程手段构建EGF与
IgG1Fc融合蛋白表达盒，进一步构建哺乳
动物细胞表达载体，转染哺乳动物细胞高
表达生产EGF-Fc融合蛋白，进而纯化、
鉴定和生物活性测试。本发明的一种EGF-
Fc融合蛋白哺乳动物表达体系高表达生产
方法，通过使用发明构建的EGF-Fc表达
元件组合，瞬时转染HEK293T或CHO-K1
细胞进行EGF-Fc融合蛋白的表达，能获
得25mg/L的高产率，且获得的融合蛋白具
有很高的纯度和活性，运用此方法生产的
EGF-Fc融合蛋白可用于科研、制药、化妆
品活性添加剂等方面。
法律状态
法律状态公告日法律状态信息法律状态
权利要求说明书
1.一种用于哺乳动物表达体系高表达EGF-Fc融合蛋白的核酸序列，其特
征在于包含：Kozak序列、IL-2信号肽编码序列、人工内含子序列、EGF成
熟肽编码序列和Fc片段的编码序列，如SEQIDNO:4所示。
2.一种EGF-Fc融合蛋白，EGF是指人的EGF(Asn971-Arg1023)，Fc片段
来自人的IgG1，其特征在于：所述Fc序列位于EGF序列的羧基端，所述
EGF-Fc氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。
3.根据权利要求2所述的EGF-Fc融合蛋白，其特征在于：所述EGF与Fc
序列之间为直接融合或通过连接序列融合。
4.根据权利要求2所述的EGF-Fc融合蛋白哺乳动物表达体系高表达生产
方法，其特征在于包括以下步骤：
1）人工合成编码EGF-Fc融合蛋白的DNA序列；
2）EGF-Fc融合蛋白表达盒的构建；
3）表达载体的构建；
4）EGF-Fc融合蛋白的表达与纯化；
5）EGF-Fc融合蛋白的鉴定与生物活性的测试。
5.根据权利要求4所述的EGF-Fc融合蛋白哺乳动物表达体系高表达生产
方法，其特征在于：所述EGF-Fc融合蛋白表达盒依次包括Kozak序列、
IL-2信号肽编码序列、人工内含子序列、EGF成熟肽编码序列和Fc
片段的编码序列。
6.根据权利要求4所述的EGF-Fc融合蛋白哺乳动物表达体系高表达生产
方法，其特征在于：所述表达载体的构建是通过基因工程手段将EGF-Fc融
合蛋白编码序列亚克隆到具有真核表达元件的载体上。
7.根据权利要求4所述的EGF-Fc融合蛋白哺乳动物表达体系高表达生产
方法，其特征在于：所述载体为真核载体
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