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新药实验设计

——对某新药抗癫痫的作用的大鼠药效学研究

高青胡志强刘晓凤安莲莲杨怡君

摘要目的：对比已知疗效的抗癫痫药物，明确新药抗癫痫发作的类型、效

果和剂量。

关键词：抗癫痫药效学急性毒性实验LD50量效关系

背景知识

我国目前有癫痫患者将近900万人。癫痫是一类慢性、反复性、突然发作

性大脑功能失调，其特征为脑神经元突发性异常高频率放电并向周围扩散。由于

异常放电神经元所在部分（病灶）和扩散范围不同，临床就表现为不同的运动、

感觉、意识和植物神经功能紊乱的症状。

1981年国际抗癫痫联盟根据临床和脑电波特点制定了癫痫发作的分类，沿

用至今。该分类将癫痫发作分为部分性发作、全面性发作、不能分类的癫痫发作

三类。癫痫的发病机制非常复杂，迄今尚未完全阐明。

部分性发作分为单纯部分性发作和复杂部分性发作。单纯部分性发作多为症

状性癫痫，脑器质性损害较为常见，发作时程较短，无意识障碍。复杂部分性发

作占成人癫痫发作50％以上，是由颞叶结构异常放电所致，海马和杏仁核在癫

痫的发生、发展中起重要作用。

全面性发作的特征是发作时伴有意识障碍或以意识障碍为首发症状。大部分

全面性发作与遗传关系密切，至今已知150种以上少见的基因缺陷综合征是以癫

痫大发作或肌痉挛发作为临床表现的。

癫痫发作不仅会对大脑造成不同程度的损伤，对患者的生活质量也会造成非

常严重的影响。因此，在我国，治疗癫痫病具有非常重要的意义。

前言

本实验研究针对癫痫的部分性发作和全面性发作，采用了两种模型。对于

部分性发作，采用海仁酸建立颞叶癫痫模型，，并采用苯妥英钠做阳性对照药物。

对于全面性发作，采用从日本引进的具有遗传性癫痫小发作的震颤大鼠作为实验

模型,观察新药对震颤大鼠癫痫小发作的影响。同时通过向SER大鼠头面部吹风刺

激产生强直抽搐发作,观察新药对SER大鼠癫痫大发作的影响,并采用丙戊酸钠做

阳性对照药物。从而对已经发现证实有抗癫痫作用的新药进行药效学实验。

本实验涉及三种观测指标。癫痫发作时大脑异常放电，所以用脑电波观测癫

痫发作是最常见的办法。由于癫痫常常具有运动感觉、自主神经、意识和精神

状态不同程度障碍的临床表现，故可采用行为学的观测手段，通过大鼠的

行为变化来判断癫痫发作。癫痫发作对于脑部有不同程度的损伤，Morris水

迷宫实验通过入水后搜索藏在水面下平台所需的时间采、用的策略和它们的游泳

轨迹,从而可分析和推断动物的学习、记忆和空间认知等方面的能力，能较客观

地衡量动物空间记忆、工作记忆以及空间辨别能力的改变，进而判断癫痫的发作

情况。

方法

急性毒性试验

一、LD50的测定

最小致死量是使动物刚好致死的药物剂量，但由于药物的性质，给药方法和个体

差异，每只动物的最小致死量有很大的差异，实验和统训学原理表明一群动物最

小致死量的平均值相当于半数致死量。

1、预试验：

取大鼠20只，动物体重大体相同（平均波动范围不超过20%），设5组，每组4

只，先用1:10的剂量比给药(如5mg／kg、50mg／kg、500mg／kg、5000mg／kg

固定剂量)，分别按组腹腔注射新药。观察一段时间，观察大鼠出现的症状并记

录死亡动物数。然后在死亡数4／4和0／4两组之间按1:2(如50mg/kg、100mg/kg、

200mg／kg、400mg／kg)以下的剂量比进行重复试验，以此测得近似的引起0%

和100％死亡率剂量的所在范围，即最大剂量(Dm)和最小剂量(Dn)。

2、正式试验：

2.1观察指标

皮肤、粘膜、毛色、眼睛、呼吸、循环、自主及中枢神经系统行为表现等。症状

出现和消失的时间，死亡时间。最后全部动物测量体重处死并剖检，肉眼观察病

变情况。有毒性反应、体重减轻或脏器有病变的动物应在剖检后立即进行主要脏

器的病理组织学观察

2.2实验操作

在预试验的Dn和Dm剂量范围内按等比设5个剂量组，使组间距K在0.7-0.85范围

内，尽可能使半数组的死亡率都在50%以上，另半数组的死亡率都在50%以下，

各组动物只数应相等，每组10只以上，雌雄各半，动物按区组随机法均匀分配，

分别编号。给药前应禁食(不禁水)过夜。各给药组和溶剂对照组按体重腹腔注射

给药后，多次观察并及时详细记录毒