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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书
(10)申请公布号CN1605592A
(43)申请公布日2005.04.13
(21)申请号CN200310100138.0
(22)申请日2003.10.10
(71)申请人中国人民解放军事医学科学院生物工程研究所
地址100071北京市丰台区东大街20号
(72)发明人刘志敏赵洪亮薛冲朱厚础张伟黎明张士猛熊向华
(74)专利代理机构
代理人
(51)Int.CI
C07K14/48
C12N15/63
C12N15/81
C12P21/00
A61K38/18
A61P3/04
权利要求说明书说明书幅图
(54)发明名称
蛋白酶抗性人睫状神经营养因子突
变体及其生产方法和用途
(57)摘要
本发明涉及一种蛋白酶抗性的人睫
状神经营养因子突变体。该突变体是由天
然人睫状神经营养因子突变而成，所说的
突变包括其第13位和第14位氨基酸残基
单独或同时突变为除精氨酸残基以外的任
意氨基酸残基。该突变体可在酵母表达系
统实现高效表达。与现有技术相比，本发
明的突变体具有更高的生物活性和临床应
用前景，在生物医药领域中具有广泛的用
途。
法律状态
法律状态公告日法律状态信息法律状态
权利要求说明书
一种蛋白酶抗性人睫状神经营养因子突变体1.,其特征在于该突变体是由天然人
睫状神经营养因子突变而成,所说的突变包括其第13位和第14位氨基酸残基单独
或同时突变为除精氨酸残基以外的任意氨基酸残基。
权利要求2.1所述的蛋白酶抗性人睫状神经营养因子突变体,其特征在于所说的
第13和第14位氨基酸残基为赖氨酸、亮氨酸或丙氨酸残基。
权利要求3.1所述的蛋白酶抗性人睫状神经营养因子突变体,其特征在于该突变
体具有序列表中序列鉴定号1所示的氨基酸序列。
一种表达载体4.,其特征在于它含有编码权利要求3所述氨基酸序列的DNA序
列。
一种宿主细胞5.,其特征在于它含有权利要求4所述的表达载体。
权利要求6.5所述的宿主细胞,其特征在于该宿主细胞是甲醇酵母细胞。
权利要求7.6所述的宿主细胞,其特征在于所说的甲醇酵母细胞是巴斯德毕赤酵
母。
权利要求8.7所述的宿主细胞,其特征在于该宿主细胞基因组中整合有编码人睫
状神经营养因子突变体的DNA序列,而且在所说的编码人睫状神经营养因子突变体
的DNA序列的5′端上游与巴斯德毕赤酵母菌来源的5′调控区可操作地相连,所说的
5′调控区包含内含启动子元件和Kozak序列增强子元件,所说的编码人睫状神经营
养因子突变体的DNA序列的3′端下游与甲醇酵母来源的3′终止序列可操作地相连。
权利要求9.8所述的宿主细胞,其特征在于所说的5′调控区选自以下基因的5′调
控区:毕赤酵母来源的醇氧化酶(AOX1和AOX2)基因、3-磷酸甘油醛脱氢酶基因
(GAP)、甲醛脱氢酶基因(FLD1)、二羟基丙酮合成酶(DAS1)基因或组氨醇脱氧酶
(HIS4)基因;所说的3′终止序列选自以下基因的3′终止序列:巴斯德毕赤酵母来源的
AOX1基因、AOX2基因、p40基因和His4基因。
权利要求10.9所述的宿主细胞,其特征在于在所说的编码人睫状神经营养因子突
变体的DNA序列与5′调控区之间,还含有酿酒酵母来源的α-交配因子基因引导肽序
列的编码序列。
权利要求11.8、9、10所述的宿主细胞,其特征在于所说的Kozak序列增强子元
件为AAA
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