一种具有功能结构的重组人源III型胶原蛋白及其表达方法[发明专利].pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN111087464A

(43)申请公布日2020.05.01

(21)申请号201911384531.4C12N9/02(2006.01)

C12N15/53(2006.01)

(22)申请日2019.12.28

C12N1/21(2006.01)

(71)申请人河北纳科生物科技有限公司C12R1/19(2006.01)

地址050035河北省石家庄市高新区祁连

街95号慧谷大厦A座22层2208

(72)发明人徐兰举齐磊刘鑫申翠美

杜亚东

(74)专利代理机构石家庄德皓专利代理事务所

(普通合伙)13129

代理人刘磊娜

(51)Int.Cl.

C07K14/78(2006.01)

C12N15/12(2006.01)

C12N15/70(2006.01)

C12N15/66(2006.01)权利要求书1页说明书8页

序列表4页附图10页

(54)发明名称

一种具有功能结构的重组人源III型胶原蛋

白及其表达方法

(57)摘要

本发明涉及一种具有功能结构的重组人源

III型胶原蛋白及其原核表达方法，所述的人源

III型胶原蛋白的编码基因的核苷酸序列为SEQ

IDNO:3所示，通过与基因序列为SEQIDNO:4的

羟化酶Hy726共同表达，得到具有三级螺旋结构

的重组人源III型胶原蛋白，该蛋白具有更好的

稳定性和功能性，更能媲美天然人源III型胶原

蛋白生物活性。

A

4

6

4

7

8

0

1

1

1

N

C

权利要求书

CN111087464A1/1页

1.一种具有功能结构的重组人源III型胶原蛋白，其特征在于，其具有三级结构，其编

码基因的核苷酸序列为SEQIDNO:3所示。

2.一种参与如权利要求1所述的胶原蛋白表达的羟化酶Hy726基因，其特征在于，其核

苷酸序列为为SEQIDNO:4所示。

3.一种包含如权利要求1所述人源III型胶原蛋白的编码基因和如权利要求2所述的羟

化酶Hy726基因的重组表达载体pACYCDuet1-Hy726-1230。

4.一种含有如权利要求3所述重组表达载体pACYCDuet1-Hy726-1230的重组基因工程

菌，其特征在于，所述重组基因工程菌的宿主细胞为大肠杆菌BL21(DE3)。

5.一种如权利要求1所述的具有功能结构的重组人源III型胶原蛋白原核表达方法，其

特征在于，具体包括如下步骤：

（1）基因设计和合成

依据人源III型胶原蛋白氨基酸序列SEQIDNO:1和巨型病毒4-脯氨酸羟化酶氨基酸

序列SEQIDNO:2，反向设计基因序列，进行密码子优化，得到人源III型胶原蛋白的编码基

因序列SEQIDNO:3和羟化酶Hy726基因序列SEQIDNO:4，进而根据SEQIDNO:3和SEQID

NO:4所示基因序列，分别进行全基因合成；

（2）重组表达载体pACYCDuet1-Hy726-1230的构建：

a）将所述人