原创力文档- 1、本文档共11页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
文档收集于互联网，已重新整理排版.word版本可编辑,有帮助欢迎下载支持.
WesternBlotting
本次试验的目的是使同学们掌握WesternBlotting法鉴定目标蛋白的原理和
熟悉WesternBlotting的方法，并了解抗原抗体结合反应的影响因素。
WesternBlotting的blotting译为印迹法，是指将样品转移到固相载体
上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。1975年，Southern建
立了将DNA转移到硝酸纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测
特定的DNA片段的方法，称为Southern印迹法。而后人们用类似的方法，对
RNA和蛋白质进行印迹分析，对RNA的印迹分析称为Northern印迹法，对
单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法，对双向电泳后蛋白
质分子的印迹分析称为Eastern印迹法。
Western既可以定性，又可以半定量，是初步鉴定蛋白质最方便也是最通
用的方法。它通常分为两种方法：
WesternBlotting方法一:直接法方法二:间接法
优点：1.快速（一种抗体）1.免特异性不受标记影
2.没有二抗交叉反应引起响
的非特异性条带2.信号放大灵敏度高（多
个二抗结合位点）
3.多种标记的二抗可供
选择
4.可选择不同的Marker
缺点：1.免疫反应性降低1.交叉反应引起的非特
1文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.
文档收集于互联网，已重新整理排版.word版本可编辑,有帮助欢迎下载支持.
2.无信号二级放大异性条带
3.抗体标记费时昂贵,使2.额外的二抗孵育以及
用不方便条件优化
同时Western又具有多种识别蛋白质的显色方法，主要有以下几种：i.放
射自显影ii.底物化学发光ECLiii.底物荧光ECFiv.底物DAB呈色现常
用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色。
一、实验原理
WesternBlotting（蛋白质免疫印迹法）是将经聚丙烯酰胺凝胶电泳奋力
的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价
键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相
载体上的蛋白质为抗原，与之对应的第一抗体发生免疫结合反应，一抗再与酶或
同位素标记的第二抗体发生免疫结合反应，经过底物显色活放射自显影以检查电
泳分离的提议目的蛋白成分。蛋白质印迹技术结合了凝胶电泳分辨力高和固相免
疫测定特异性高、敏感等诸多优点，能从复杂混合物中对特定抗原进行鉴别和定
量检测。
聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(Acr)、N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)和催
化剂(AP)、加速剂(TEMED聚合成的三维网孔结构(凝胶）。据有无浓缩效应可将
电泳分为两类：
i.连续系统：缓冲液pH值、凝胶浓度
文档评论（0）