三叶青黄酮诱导髓系白血病NB-4细胞凋亡及信号通路的研究 .pdfVIP

三叶青黄酮诱导髓系白血病NB-4细胞凋亡及信号通路的研

究

吴海英;吴元庭;陈优优;骆惠丽;蒋慧芳

【摘要】目的:研究三叶青黄酮(RTHF)对人急性早幼粒细胞白血病NB-4细胞活力、

凋亡及MAPK信号通路的影响.方法:采用CCK-8法及BrdU实验分别检测RTHF

对NB-4细胞活力及增殖的影响;流式细胞术检测RTHF诱导细胞凋亡及阻滞细胞

周期的作用.Westernblot分析RTHF对细胞凋亡及MAPK信号通路相关蛋白表

达的影响.结果:RTHF有效地抑制NB-4细胞的活力及增殖,呈时间和剂量依赖性,作

用48h的IC50为2.26g/L.RTHF阻滞NB-4细胞进入增殖周期,停滞在G2期,并

诱导其凋亡(P0.01),呈剂量依赖性.RTHF下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调促凋

亡蛋白Bax、caspase-3和Cyt-C的表达,呈剂量依赖性(P0.05).RTHF对

ERK1/2及JNK的表达无明显影响,但可降低ERK5蛋白表达,提高p38的表达水平

(P0.05).结论:RTHF在体外有效地抑制白血病NB-4细胞活力及增殖,并诱导凋亡,

其机制可能通过p38MAPK信号通路及凋亡蛋白途径.

【期刊名称】《中国病理生理杂志》

【年(卷),期】2019(035)008

【总页数】6页(P1451-1456)

【关键词】三叶青黄酮;白血病;NB-4细胞;细胞凋亡;MAPK信号通路

【作者】吴海英;吴元庭;陈优优;骆惠丽;蒋慧芳

【作者单位】浙江省立同德医院血液科,浙江杭州310012;浙江省立同德医院血液

科,浙江杭州310012;浙江省立同德医院血液科,浙江杭州310012;浙江省立同德

医院血液科,浙江杭州310012;浙江省立同德医院血液科,浙江杭州310012

【正文语种】中文

【中图分类】R733.7;R363.2

急性白血病(acuteleukemia，AL)是早期造血前体细胞突变导致的造血系统恶性

肿瘤。我国急性白血病发病率约为6～7人/10万人口，约占肿瘤总发病率的5%。

近年来，对白血病的治疗取得了很大的进展，在传统化疗基础上，高危患者选择骨

髓移植，另外靶向治疗、细胞免疫治疗以及CAR-T等疗法在急性白血病领域得到

飞跃性发展[1-3]。尽管如此，因疾病的异质性、化疗或靶向治疗所致的毒副反应

及其耐药性等仍是尚未解决的难题，许多患者在确诊后的生存期仅数月。因此，急

性白血病的治疗对每一个临床医生来说仍是一个任重道远的任务，需要我们进一步

探讨新的治疗手段。

中医中药是我国的宝贵资源，如来自中药的砷剂在急性早幼粒白血病中运用和高三

尖杉酯碱治疗急性髓系白血病都是极为成功的例子，说明研究抗白血病的中药具有

重要意义。三叶青为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤(Tetrastigmahemsleyanum，

TH)，现代研究表明黄酮类化合物是中药三叶青抗肿瘤主要成分之一。国内外研究

发现三叶青黄酮(RadixTetrastigmahemsleyaniflavone，RTHF)主要通过提高

机体免疫力及调控细胞的增殖、分化和凋亡等途径达到抗肿瘤作用。RTHF对急性

白血病细胞的研究目前尚未见报道。本文观察RTHF对白血病NB-4细胞株的活力

及凋亡的影响，并通过对丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activatedprotein

kinases，MAPK)信号通路的调控，来揭示RTHF抑制白血病细胞活力及诱导凋亡

的机制，为今后使之成为抗白血病的中药新药提供实验依据。

材料和方法

1细胞株

人急性早幼粒细胞白血病NB-4细胞购自上海拜力生物科技有限公司。先把

DMSO溶解成高浓度的母液4.5g/mL，然后用PBS稀释100倍，再进行细胞加

药处理，保证细胞里的终浓度DMSO0.1%。

2主要试剂与仪器

RTHF购自西安金绿生物公司；CCK-8检测试剂盒购自碧云天公司；BrdU试剂盒

购自BioVision；周期检测试剂盒购自北京嘉美生物公司；AnnexinV-FITC/PI试

剂盒购自南京凯基生物公司；抗Bcl-2、细胞色素