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紫草素对人肝癌HepG2细胞细胞周期的影响

目的研究紫草素对人肝癌HepG2细胞周期的影响。方法取处于对数生长期

人肝癌HepG2细胞，设空白对照组，紫草素低、中、高剂量组（5、10、20μg/ml）

和顺铂（40μg/ml）组；给药干预48h，观察细胞生长状况，检测细胞增值抑制

率，流式细胞术（FCM）检测细胞周期。结果光学显微镜下观察可见空白对照

组人肝癌HepG2细胞呈贴壁生长，增殖迅速，而紫草素各剂量组细胞增殖受到

抑制，细胞数明显减少，呈现回缩、脱落现象。与空白对照组比较发现经紫草素

干预48h能够显著提高HepG2细胞增殖抑制率，显著延长细胞周期G0/G1期并

缩短S期、G2/M期，差异均具有統计学意义（P＜005或P＜0.01）。结论紫草素

能够将人肝癌HepG2细胞周期显著阻滞于G0/G1期，可能是紫草素抑制肝癌细

胞增殖的机制之一。

标签：紫草素；肝癌细胞；顺铂；细胞周期；生长

肝癌是我国发病率最高的恶性肿瘤之一，致死率居恶性肿瘤第二位，严重威

胁着人们的身体健康，是临床上亟待解决的一个难题。大多数肝癌患者就诊时已

达病程中晚期、失去手术机会，目前临床上手术切除率仅为20%[1]，且5年复

发率高达60%以上[2]。而化疗耐药是影响肝癌患者术后化疗效果的主要因素之

一[3-4]，因此寻找高效、低毒的化疗增敏剂或许是解决化疗耐药、改善治疗效果

的有效手段。紫草素是中药紫草的主要活性成分，具有抗炎、增强机体免疫力等

广泛的生物学活性[5-6]，近年来研究发现紫草素对乳腺癌、喉癌、子宫内膜癌、

宫颈癌、白血病等均具有一定的抑制作用[7-10]，但紫草素是否对肝癌具有治疗

作用尚未见文献报道，本实验将通过体外培养人肝癌HepG2细胞并给予紫草素

进行干预，通过相关指标检测探讨紫草素对肝癌细胞周期的影响。

材料与方法

一、细胞、药物与试剂人肝癌HepG2细胞株由河北医科大学细胞生物研究

室惠赠；紫草素购自中国药品生物制品检定所（纯度≥98%）；注射用顺铂购自山

东齐鲁制药有限公司；DMEM高糖培养基、胰蛋白酶、胎牛血清购自Gibco公

司；MTT购自Sigma公司。

二、主要仪器超净工作台（江苏苏净集团有限公司）；细胞培养箱（美国

ThermoElectron公司）；酶标仪（美国BIO-RAD公司）。

三、细胞培养、分组与给药人肝癌HepG2细胞株经复苏后植入DMEM高糖

培养基进行培养并取对数生长期细胞进行下一步实验：0.25%胰酶消化、调整细

胞浓度为5×104/ml后分为空白对照组、紫草素（5、10、20μg/ml）组和顺铂

（40μg/ml）组，n=10；各组细胞继续培养24h后分别给予相应浓度药物进行干

预，48h后行各指标检测。

四、光学显微镜观察细胞生长状态以及MTT法检测细胞增殖抑制率给药48h

后，各组细胞通过倒置光学显微镜观察生长状态。MTT法检测细胞增殖抑制率：

首先调整细胞浓度至5×104/ml后移至96孔板，每孔滴加浓度为5mg/ml的MTT

溶液20μl、继续培养4h后去上清、滴加二甲基亚砜（DMSO）200μl，振荡孵育

10min后通过酶标仪检测波长570nm处吸光度（OD）值，计算公式：细胞增殖

抑制率（%）=[1-（实验组OD值-空白组OD值）/（对照组OD值-空白组OD

值）]×100%

五、细胞周期的检测各组细胞经PBS洗涤、加入70%乙醇5ml混匀并置4℃

环境48h后离心取细胞，经PBS洗涤并打散细胞团后加5μl水解酶Rnase

（10mg/ml），置37℃环境1h，加入碘化丙啶染液，避光孵育30min，然后通过

流式细胞仪进行检测，采用CELLQuest软件分析各组细胞的细胞周期时相。

六、统计学处理运用软件SPSS15.0进行统计分析，组间均数比较采用单因

素方差分析，两两比较采用LSD-t检验；P＜005为差异有统计学意义。

结果

一、各组细胞生长状态观察结果空白对照组人肝癌HepG2细胞呈贴壁生长、

增殖迅速，生长状态良好；较空白对照组，紫草素各剂量组和顺铂组HepG