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砧用南瓜耐低温鉴定技术规程

范围

本文件规定了砧用南瓜苗期耐低温鉴定的定义和术语、耐低温性鉴定、耐低温性综合判定、耐低温评价分级等内容。

本文件适用于砧用南瓜苗期的耐低温性鉴定。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T16715.1瓜菜作物种子第1部分：瓜类

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

耐低温性Chilling-resistance

指砧用南瓜在低温胁迫下，其生长发育对低温胁迫的耐受能力。

冷害Colddamage

指农作物生长季节，0℃以上低温对砧用南瓜的损害。

耐低温性级别Chillingresistancelevel

按照耐低温性从强到弱的分级。

耐低温性鉴定

播种、催芽

砧用南瓜种子质量应符合GB16715.1的要求?挑选300粒饱满砧用南瓜种子，在55℃温烫水中消毒20min，在28℃~30℃温水中浸种6h，在恒温培养箱中30℃催芽，待种子萌发露白后播于32孔穴盘中，待培养?

样本幼苗培养

将已播好样本种子的穴盘置于人工气候室中，昼/夜为28℃/15℃（12h/12h）、光照强度为300μmol.m-2S-1、相对湿度为75%。待幼苗生长到“两叶一心”时，选取长势整齐一致的幼苗，分为2组，即低温胁迫处理组和常温对照组，每个处理96株，每个处理3次重复，每重复32株。将各处理移入相应的人工气候室，待处理。

试验方案

处理一：相对湿度为75%，光照强度300μmol.m-2S-1，光照时间12h，昼/夜温度为10℃/5℃处理7d后，调查砧用南瓜幼苗的冷害指数，测定砧用南瓜幼苗叶片中的相对电导率、丙二醛含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量（测定方法参照附录A），而后转入光照强度300μmol.m-2S-1、昼/夜温度为28℃/15℃（12h/12h)的人工气候室培养3d，统计各处理植株的存活率，档案记载见附录B1。

对照：相对湿度为75%，光照强度300μmol.m-2S-1，光照时间12h，昼/夜温度为28℃/15℃，7d后，测定砧用南瓜幼苗叶片中的相对电导率、丙二醛含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量（测定方法参照附录A），10d后统计植株存活率，档案记载见附录B1。

指标检测方法

相对电导率采用电导法测定，档案记载见附录B.1；

丙二醛含量用2-硫代巴比妥酸法测定，档案记载表见附录B.2；

脯氨酸含量用酸性茚三酮比色法测定，档案记载表见附录B.3；

可溶性蛋白含量用考马斯亮蓝法测定，档案记载表见附录B.4；

冷害程度根据叶片受损情况分级，分级标准见表1，档案记载表见附录B.5。

表1砧用南瓜冷害级别划分

冷害级别

冷害症状描述

0级

秧苗生长正常，无任何受冻症状

1级

1-2片叶受冻，受冻面积30%

2级

3-5片叶受冻，1-3片叶受冻面积50%

3级

叶片全部受冻，3片以上受冻面积50%

4级

全株受冻死亡或接近死亡

冷害指数的计算按公式（1）：

冷害指数（CI）=（Σ冷害级数×该级株数）/（总株数×最高级别数）×100

存活率(S)为存活数与总株数的百分比，S=存活数/总株数×100。

耐低温综合判定

对测定的相对电导率、丙二醛含量、脯氨酸含量、可溶性糖含量、冷害指数值，通过采用隶属函数法对数据进行统计和分析，各样本各指标隶属函数值进行累加后得到的平均值即为平均隶属度，用于综合评价砧用南瓜样本的耐低温能力，平均隶属度越高则材料耐低温性越强，低温处理后的存活数能要在一定程度上反应植株的耐寒性，存活率越高表明耐寒性越高，具体计算公式参照附录A.5。

耐低温评价分级

根据Pij判断耐低温性强弱，分为4级：0.70≦Pij≦1.00为强耐低温，0.60≦Pij≦0.69为耐低温，0.30≦Pij≦0.59为中等耐低温，0≦Pij≦0.29为不耐低温，档案记载见附录A7。

`Pij

耐低温等级

0.70~1.00

强耐低温

0.60~0.69

耐低温

0.30~0.59

中耐低温

≦0.29

不耐低温

（资料性）

检测指标的测定方法

A.1相对电导率测定

采用电导法，分别选取处理组、对照组植株距生长点第3片完全展开叶，叶片用蒸馏水冲洗2次，吸水纸吸干后，用直径6mm~8mm的打孔器避开主脉取0.1g叶圆片浸润在10mL去离子水中，置于摇床25°C震荡30min，测定第一次电导，记为EL1；随后置于沸水浴中处理15min，于25°C冷却后测定第二次电导，记为EL2，计