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分子生物学之应用与发展

授课教师：李元凤

一、重组DNA(RecombinantDNA)的步骤

1.选择载体(cloningvector)

2.以适当的限制脢(restrictionendonuclease)切分载体

3.将欲选殖或增幅之外来DNA与载体接合(ligation)，形成杂合DNA(hybrid

DNA)

4.将杂合DNA送入宿主(host)细胞中，此谓转型(transformation)

5.筛选及鉴定正确之杂合DNA

载体的来源

1.细菌:细菌体内含有会自行复制之小分子核酸个体

2.噬菌体(bacteriophage)

3.酵母菌(yeast):酵母菌体内含有会自行复制之核酸个体

重组DNA的来源

1.化学合成

2.大分子DNA以限制脢切成小分子DNA

3.mRNA反转录(reversetranscription)合成cDNA

转型

1.利用细菌转型法将杂合DNA送回细菌体内

2.利用酵母菌转型法将杂合DNA送回酵母菌体内

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二、分离与选殖单一基因

1.重组DNA技术可以增幅，或是鉴定未知基因之DNA序列及其功能。若要

选殖基因，则需先建立基因库(genomiclibrary)，筛选各种基因。

2.筛选的方法有数种，最常用的方法之一为南方点墨杂交法(Southern

hybridization)

重组DNA技术的应用

1.重组蛋白质(recombinantprotein)之生产

2.基因改造之物种(农作物或微生物)

3.基因治疗(genetherapy)

三、以聚合脢连锁反应(polymerasechainreaction,PCR)来增幅DNA

1.如果DNA序列已知的话，则可用PCR来大量增幅此DNA片段

2.PCR反应需要三种主要成分:人工合成的DNA引子(primers)，耐热DNA聚

合脢(polymerase)及去氧核糖核甘酸(dATP,dTTP,dCTP,dGTP)

3.PCR以下列三个步骤做循环反应:变性(denaturation)，黏合(annealing)及

DNA合成(polymerization)反应

四、PCR的应用

1.医学诊断(medicaldiagnostics):传染性病源，遗传疾病，癌症

2.法医学(Forensics):DNAfingerprint

五、微点阵(Microarray)及生物晶片(Biochip)

1.将探针(通常是DNA或cDNA)以高密度点阵排列在一小片基质上，即所谓”

晶片”。

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2.待测样本与此晶片上的探针做杂交。只需一次实验，DNA/cDNA晶片就能

够将成千上万的基因序列或表现型式记录下来。

六、以分子遗传学筛检海洋性贫血(Thalassemia)

海洋性贫血是一种先天遗传性的血液疾病，人体之正常红血球含有A，A2

及F三种血红素，这些血红素皆由四条血红蛋白链组成，分为

(HbA),(HbA),(HbF)。如基因突变则造成某种血红蛋白链合成不

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足，而其他蛋白链合成过剩，导致造血不足或易溶血之现象，即为贫血。血

红蛋白链基因分析的检体可来自血液，羊水或胎盘之绒毛。DNA分析有下

列两种方法:

1.南方点墨杂交法(Southernhybridization)

利用血红蛋白链的基因做探针(probe)与待测DNA杂交，经由电泳分离后，

以其特殊之型式诊断是否有基因突变。

2.聚合脢连锁反应