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环丙沙星论文：环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性
的鉴定
【中文摘要】环丙沙星(Crprofloxacin,CPFX)属于氟喹诺酮类广
谱高效抗菌药物,是获美国FDA批准在美国上市的第二个喹诺酮类药
物。对革兰氏阴性菌有很强的杀伤力,能够抑制细菌的DNA螺旋酶,
抗菌谱广、低毒、组织穿透力强,被用于兽医临床和畜牧生产中,用来
治疗动物疾病。但在实际应用中由于盲目及不合理应用,导致了耐药
菌株的出现,并且在动物组织内的残留经食物链进入人体后,对人体
具有潜在的致癌性,会对人体的健康造成威胁。许多国家已经对其休
药期和在畜产品中的最高残留限量做出了限制。因此,环丙沙星在动
物产品中的残留已成为一个必检项目。这就迫切需要建立一套快速检
测残留的方法。本研究的是通过制备环丙沙星单克隆抗体
(Monoclonalantibody,mAb),并对其免疫学特性进行鉴定,为畜产品
中环丙沙星残留检测阻断ELISA试剂盒做技术支持,使之应用于动物
性食品质量监测,从而保障动物性食品安全。本试验采用碳二亚胺法
(EDC)将载体蛋白牛血清白蛋白(Bovineserumalbumin,BSA)和鸡卵
白蛋白(Ovalbumin,OVA)分别与CPFX偶联合成免疫抗原CPFX-BSA和
包被抗原CPFX-OVA,经紫外(UV)扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳
(SDS)鉴定,表明人工抗原偶联成功;用免疫抗原免疫BALB/c小
鼠,免疫的5只小鼠血清抗体效价均达到了1:105左右,其中4号小鼠
血清效价最高并且半数抑制浓度(50%inhibiting
concentration,IC50)最低(17.21ug/L);通过细胞融合技术并且应
用间接ELISA和阻断ELISA筛选分泌CPFXmAb的杂交瘤细胞株,细胞
融合后筛选出1株敏感特异的杂交瘤细胞株,命名为3D2;采用体内诱
生腹水法制备CPFXmAb,并对其染色体核型、效价、敏感性和特异性
等免疫学特性进行鉴定。经鉴定,其细胞培养上清效价为1:1.28×103,
腹水效价为1:1.6×105。其对CPFX的IC50为9.95ug/L,对恩诺沙
星的交叉反应率为128.39%,与其它同系的喹诺酮类抗生素的交叉反
应率很低。本实验获得了高价、敏感、特异的抗CPFXmAb,为CPFX
残留快速检测ELISA试剂盒奠定了基础。
【英文摘要】Theciprofloxacin(CPFX)belongstothe
fluoroquinolone(FQNs)group.Asthesecondantibacterial
agentoftheFQNsgroupthatwaspermeatedtosale.Itcan
efficientlydamagethebacteriaofGram-positivthrough
inhibitingtheDNAhelicase.Ithastheadvantagesof
broad-spectrumofantibacterial,lowtoxin,broadlyspreadin
thebody.Soitwasappliedwidelyespeciallyintheclinicof
animalsandproductionoffarming,Usetotreatdigestive
infectionsinfarmingindustriesasfeedadditives.Thewide
spreaduseofantibioticsinfood-producinganimalshascaused
publicconcernduetothetransferofantibiotic-resistant
bacteriatoman,Ithasthelatentcausecancerandeffectthe
healthofhuman.Inmanycountries,withdrawal
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