毛细管电泳和毛细管电色谱.ppt

3.4.1.填充柱3.4.1.2.填充柱制备高压匀浆填充法电动填充法第31页,共38页，星期六，2024年，5月3.4.1.填充柱3.4.1.3.CEC填充固定相在成功掌握填充柱制备技术条件下，CEC固定相是影响毛细管填充柱分离选择性、柱效、分离速度的重要因素，也是发展新型CEC分离模式的基础。应用于HPLC的各种固定相已被应用于CEC的分离分析中，其中以十八烷基键合硅胶固定相(ODS)研究最多，由于CEC是以电驱动流动相，不存在柱压降问题，因而可以采用粒径很小的固定相，以提高柱效。混合官能团固定相是专门针对CEC研制的新型填料，这一类固定相在硅胶表面同时键合具有反相色谱性能的烷基官能团和具有离子交换性质的磺酸官能团，在很宽的pH范围内都能保持良好的电渗流。第32页,共38页，星期六，2024年，5月3.4.1.填充柱3.4.1.3.CEC填充固定相第33页,共38页，星期六，2024年，5月3.4.1.填充柱3.4.1.4.气泡问题填充柱CEC操作中的困难是在分离过程中常常伴有气泡产生。气泡一般产生于柱塞与填料交界处或柱塞与检测窗口交界处。控制气泡的产生，目前主要采取以下措施：1.加压，在两端同时施加低压，可较好解决气泡问题。2.制备渗透性好的塞子。3.利用阻尼管以消除气泡，在分流阀处接一阻尼管，当电极处有气泡产生时，气泡会经分流阀通过阻尼管排出。4.利用超声波使样品和流动相充分脱气。第34页,共38页，星期六，2024年，5月3.4.2.开管柱开管柱CEC是在管壁键合或涂覆固定相，引入色谱分配机理。优点：无须烧制柱端塞子，少有气泡产生。开管柱CEC无涡流扩散，能获得比填充柱CEC更高的柱效。缺点：开管毛细管电色谱柱相比是填充柱的1/350，柱容量低，对溶质的保留有限。开管柱制备的关键是增大表面积，以制备相比大、柱容量高的色谱柱。主要制备方法有：涂覆聚合物固定相、化学键合固定相和溶胶-凝胶技术。第35页,共38页，星期六，2024年，5月3.4.3.整体柱（连续床）整体柱（又称为连续床）是近年来发展的CEC制柱新技术，其结构和制备技术与HPLC整体柱相同，一般采用柱内直接聚合的方法，形成整块多孔的交联聚合物，无须制作柱塞，因而简化了CEC柱制备过程。得到的固定相含有通透孔和微孔网络结构，有很好的渗透性，对流动相阻力小，溶质在流动相与固定相间快速分配，实现高速高效分离分析。按照制柱材料，可分为有机高分子整体柱和硅胶基质整体柱。有机高分子整体柱的制备方法是将功能单体、交联剂和致孔剂混合溶液注入毛细管内，在一定的条件下发生原位自由基聚合反应。另一种方法是先在毛细管内填充HPLC固定相，再将反应剂四甲氧基硅烷、致孔剂、缓冲溶液等充分混和后引入毛细管反应，经后续处理形成连续床固定相。第36页,共38页，星期六，2024年，5月3.4.4.CEC应用反相CEC分离14种火药及其降解成分第37页,共38页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第38页,共38页，星期六，2024年，5月关于毛细管电泳和毛细管电色谱毛细管电泳（capillaryelectrophoresis;CE）是一类以高压直流电场为驱动力，毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为的差异而实现分离的新型液相分离分析技术。毛细管电泳是分析科学中继高效液相色谱之后的又一重大进展，它使分析科学从微升水平得以进入纳升水平，并使单细胞分析成为可能。毛细管电色谱（capillaryelectrochromatography;CEC）是毛细管电泳与液相色谱相结合形成的一种高效、快速微分离分析技术。第2页,共38页，星期六，2024年，5月3.1．毛细管电泳和毛细管电色谱的基本理论3.1.1．双电层和Zeta电势第3页,共38页，星期六，2024年，5月3.1.2．电泳在电解质溶液中，带电粒子在电场作用下，以不同的速度或速率向其所带电荷相反电场方向迁移的现象叫作电泳。阴离子向正极方向迁移，阳离子向负极方向迁移，中性化合物不带电荷，不发生电泳运动。在充满自由溶液开口管中球形粒子的电泳速率公式为：电泳淌度（μep)定义为单位场强下离子的平均电泳速率，即第4页,共38页，星期六，2024年，5月3.1.3．电渗流电渗是毛细管中整体溶剂或介质在轴向直流电场作用下发生的定向