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大蒜及其制品中蒜氨酸的测定高效液相色谱法

1范围

本文件规定了大蒜及其制品（大蒜粉、大蒜片、大蒜片剂、大蒜软膏剂）中活性成分蒜氨酸（S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜）含量的高效液相色谱测定方法。

本文件适用于大蒜及其制品（大蒜粉、大蒜片、大蒜片剂、大蒜软膏剂）中蒜氨酸的含量测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T2643大蒜及制品中蒜素的测定高效液相色谱法

NY/T3871大蒜中蒜氨酸的测定高效液相色谱法

NY/T4351大蒜及其制品中水溶性有机硫化合物的测定液相色谱-串联质谱法

T/HAS105饲料原料大蒜粉

DB65/T4511高蒜氨酸含量大蒜质量评价规范

3术语和定义

蒜氨酸AlliinS-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜（S-allyl-L-cysteinesulfoxide），分子式为C6H11NO3S，CAS#：556-27-4，相对分子质量为177.22。

4原理

大蒜及其制品中蒜氨酸在紫外光区214nm波长处有最大吸收，经灭酶、水提取、液相色谱分离后，紫外检测器测定，外标法定量。

5试剂或材料

5.1试剂

5.1.1甲醇（CH3OH）：分析纯（用于样品前处理）、色谱纯（用于HPLC分析）。

5.1.2三氟乙酸（CF3COOH）：色谱纯。

5.2溶液配制

三氟乙酸溶液（0.06%，体积分数）：准确吸取0.60mL三氟乙酸（4.1.2）于预先加入一定量水的1000mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，经0.22μm滤膜过滤。

5.3标准样品

蒜氨酸标准样品（Alliin，C6H11NO3S，CAS：556-27-4）：含量≥99.0%。

5.4标准溶液配制

蒜氨酸标准储备液（200mg/L）：称取蒜氨酸标准物质0.020g（精确至0.00001g）置于100mL容量瓶中，用水溶解，稀释定容至刻度，摇匀，4℃保存，有效期1个月。

临用前，精密量取贮备液1mL，置10mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，色谱分析前用0.22μm微孔滤膜过滤。

6仪器设备

6.1高效液相色谱仪：配备紫外检测器。

6.2分析天平：感量0.1mg、0.01mg。

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6.3匀浆仪。

6.4高速粉碎机。

6.5研钵。

6.6超声波清洗仪。

6.7离心机：转速8000r/min。

6.8磁力搅拌恒温水浴锅：可控温控速。

6.9实验室可调温电炉电子万用炉。

6.10国家标准药检筛（150μm）。

7样品及试样前处理

7.1大蒜

取有代表性的大蒜样品，平行做三份试验。称取试样50g（精确至0.1mg），置于500mL烧杯中，加水200mL，水煮灭酶10min，室温冷却，匀浆1min（20000r/min），浆液定量转移置500mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，离心（8000r/min）15min，精密移取上清液1mL，置50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。色谱分析前用0.22μm微孔滤膜过滤。

7.2大蒜粉（片）

大蒜粉：通过150μm试验筛，混匀。

大蒜片：用粉碎机粉碎，通过150μm试验筛，混匀。

称取蒜粉（片）0.3g（精确至0.1mg）置于50mL容量瓶中，加无水甲醇20mL，超声10min，加水20mL，超声10min，室温冷却，用水稀释定容至刻度，混匀，离心（8000r/min）10min，吸取上清液1mL，置于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。色谱分析前用0.22μm微孔滤膜过滤。

7.3大蒜片剂

大蒜片剂：取大蒜片剂20片，用研钵研磨成粉末，混匀。

称取大蒜片剂0.3g（精确至0.1mg）置于50mL容量瓶中，加无水甲醇20mL，超声10min，加水20mL，超声10min，室温冷却，用水稀释定容至刻度，混匀，离心（8000r/min）10min，吸取上清液1mL，置于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。色谱分析前用0.22μm微孔滤膜过滤。

7.4大蒜软膏剂

称大蒜软膏剂1.0g（精确至0.1mg）置于50mL干燥的烧杯中，加预热的甲醇15mL，置磁力搅拌水浴锅（55℃)灭酶15min，加预热的水（55℃)20mL，提取5min，置50mL容量瓶中，加预热水淋洗容器，洗液合并置容量瓶中，室温冷却，加水稀释至刻度，摇匀，滤纸过滤。