中药制剂分析-第五章-中药制剂定量分析技术医学.pptVIP

在一定点样量范围内，内标法定量准确度与点样量无关，克服种了外标法必须准确点样的缺点，这是内标法的优点。但对于复杂样品，常常不易找到适宜Rf值的纯品内标物，且溶液配制等操作较麻烦，而外标法采用随行标准并用同一根定量毛细管点样，其误差在允许范围内，所以实际工作中主要采用外标法而不用内标法。回归曲线定量法：回归曲线定量法是将不同浓度(或不同量)的标推溶液与供试液点在同一块薄层板上，展开，扫描，由计算机对所测得的峰面积及相应点样量进行线性或非线性回归，直接由回归方程或回归曲线计算供试液含量的方法，CAMAG系列薄层扫描仪即采用此方法。追加法(叠加法)适用于成分复杂供试品的定量分析，既具有内标法的特点又不需要内标物，详见HPLC法。三、TLCS三、TLCS三）应用实例香连片中黄连的薄层荧光扫描法测定取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸小檗碱60mg)，置索氏提取器中，加盐酸－甲醇(1:100)的混合液适量，加热回流提取至提取液无色，将提取液移至l00ml量瓶中，用少量盐酸—甲醇(1:100)的混合液洗涤容器，洗液并入提取液中，加混合液至刻度，摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含溶液20μl、对照品溶液2μl与6μl，分别交叉点于同一硅狡G薄层板上，以苯－乙酸乙酯－异丙醇－甲醇－水(4:2:1:1:0.2)为展开剂，在另槽中加入等体积的浓氨试液，预平衡15分种后，展开，展距约10cm，取出，晾干，照薄层色谱法进行荧光扫描，激发波长λ＝366nm.测量供试品与对照品荧光强度的积分值，计算，即得。本品每片含黄连以盐酸小檗碱(C20H18ClNO4)计，小片不得少于7.0mg，大片不得少于20mg。一、HPLC该法的优点是不需内标物，又具有内标法的优点，只要两次进样时实验条件恒定即可尤其适用于低浓度多组分样品的定量分析。其缺点是需i组分的纯品。测定法：分别精密吸取对照品溶液5μL与供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每1ml含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于2.2mg。06对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品约l0mg，精密称定。置200ml量瓶中，加50％甲醇适量，置热水浴中振摇使溶解，放置至室温，并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含黄芩苷50μg)。04应用举例01色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－水—磷酸(47:53:0.2)为流动相；检测波长为276nm。理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。03供试品溶液的制备精密量取本品0.5ml，置Dl0l大吸附树脂柱(内径约l充高locm)上，以每分钟1.5ml的流速，用水70ml洗涤，继用40％乙醇洗脱9ml，收集续洗脱液，置50ml量瓶中，至刻度，摇匀，即得。05小儿热速清口服液中黄芩苷的含量测定(反相HPLC外标一点法)02一、HPLCGC基本原理气相色谱是根据汽化后的试样被载气带入色谱柱，由于各组分在两相间作用不同在色谱柱中移动有快慢，经一定柱长后得到分离，依次被载气带入检测器，将各组分浓度或质量变化转换成电信号变化记录成色谱图.利用色谱峰保留值进行定性分析，利用峰面积或峰高进行定量分析的方法。塔板理论将色谱柱的柱效用理论塔板数n或理论塔板高度H衡量，取决于区域宽度(σ、W1/2、W)，其计算公式为n＝()2＝5.54()2＝16()2式中tR为组分的保留时间，σ、W1/2、W分别为组分的标准差、半峰宽和基线宽度。若以调整保留时间tR代替，tR则得到反映色谱柱实际柱效的有效理论塔板数neff。Neff＝()2＝5.54()2＝16()2Heff＝L/neff可见，当tR一定时，峰越窄，则H越小，n越大，柱效越高，分离性能越好。二、GC速率理论速率理论研究了色谱过程中各种动力学因素对柱效(峰展宽)的影响，提出了VanDeemeter方程式：A、B/u、Cu分别为涡流扩散项、分子扩散(纵向扩散)项、传质阻抗项，从而解释了板高随载气流速而改变，且有最佳流速(Hmin)的现象。速率方程式对于色谱分离条件的选择具有指导意义，它可以说明色谱柱的填充均匀程度、载体粒度、载气种类、柱温和固定液膜厚度对柱效、峰扩张的影响。H＝A十B/u十Cu对于开口毛细管柱色谱，涡流扩散项A＝0，故VanDeemeter方程式可简化为H＝B/u＋Cu，其传质阻抗小，柱长又远远大于填充柱，所以毛细管柱的柱效要比填充柱高得多，其理论塔板数达10～l0。1234二、