多肽的转盐和纯化.pptVIP

多肽的转盐和纯化多肽的转盐多肽为什么需要转盐？1.考虑多肽的稳定性，许多肽只有在弱酸盐形式下才稳定。2.考虑多肽药物是用于人体，故其形式应接近于人体的体内环境。转盐的方法1.RP-HPLC转盐。2.离子交换树脂转盐。RP-HPLC转盐3.方法（以TFA盐转醋酸盐为例）将肽挂上反相柱后，多肽与填料结合，然后用pH接近中性的醋酸氨盐(pH值根据填料的耐受性和肽的酸碱性而定)冲洗柱子3倍柱体积左右，使得原来和肽结合的TFA-离子与NH4+离子结合而随流动相冲洗下来，而肽则与填料结合留在柱子上。然后再用适当浓度的醋酸溶液洗脱肽。4.优点适用范围广。有利于肽的稳定。5.缺点处理量小。有机溶剂使用量大，成本高。离子交换树脂简介1.离子交换树脂的分类离子交换树脂按活性基团的性质不同可分为阳离子交换剂（cationexchanger）和阴离子交换剂（anionexchanger）。前者对阳离子具有交换能力，活性基团为酸性；后者对阴离子具有交换能力，活性基团为碱性。阴阳离子交换剂根据其活性基团的电离程度强弱不同，又分为强酸性阳离子交换剂和弱酸性阳离子交换剂、强碱性阴离子交换剂和弱碱性阴离子交换剂。强离子交换剂的离子化率基本不受pH的影响，离子交换作用的pH范围广，而弱离子交换剂的离子化率受pH的影响大，离子交换作用的pH范围小。1.1阳离子交换树脂1.1.1强酸性阳离子交换树脂这类树脂的活性基团有磺酸基团(-SO3H)和次甲基磺酸基团(-CH2SO3H)。它们都是强酸性基团，电离程度大且不受溶液pH变化的影响，在pH1～14范围内均能进行离子交换反应。此外，以磷酸基团-PO(OH)2和次磷酸基团-PO(OH)作为活性基团的树脂具有中等强度的酸性。1.1.2弱酸性阳离子交换树脂这类树脂的活性基团有羧基-COOH，酚羟基-OH等，它们的电离程度小，交换性能受溶液pH的影响很大，其交换能力随溶液pH的增加而提高。在酸性溶液中，这类树脂几乎不发生交换反应、对于羧基树脂，应该在pH7的溶液中操作，而对于酚羟基树脂，应使溶液的pH＞9。1.2阴离子交换树脂1.2.1强碱性阴离子交换树脂这类树脂有两种，一种含三甲胺基称为强碱I型，另一种含二甲基-b羟基-乙基胺基团，为强碱型。和强酸离子交换相似，活性基团电离程度较强且不受pH变化的影响，在pH1～14范围内均可使用。这类树脂成氯型时较羟型稳定，耐热性也较好，因此，商品大多以氯型出售。I型的碱性比Ⅱ型强，但再生较困难，Ⅱ型树脂的稳定性较差。典型的交换反应为RN(CH3)3CI＋NaOH—→RN(CH3)3OH+NaCl1.2.2弱碱性阴离子交换树脂这类树脂的活性基团有伯胺基团-NH2、仲胺基=NH、叔胺基≡N和吡啶基等。与弱酸阳离子树脂一样，交换能力受溶液pH的影响很大，pH越小交换能力越强。故在pH7的溶液中使用。1.3离子交换树脂的型式1.3.1酸性树脂为H型或钠型，即它们的活性基团在交换之前是与H+或Na+结合的，这是由树脂活性基团的电离效果和稳定性决定的。他们的交换机理如下：（以磺酸基阳离子离子交换树脂为例）H型：RSO3H＋肽+TFA-=RSO3肽+＋H+TFA-Na型：RSO3Na＋肽+TFA-=RSO3肽+＋Na+TFA-H型树脂交换后溶液pH值将降低，故一般来说，弱酸性树脂为了使其离子化，应采用Na型。1.3.2碱性树脂为OH型或Cl型，即它们的活性基团在交换之前是与OH或Cl结合的。他们的交换机理如下：（以三甲氨基离子交换树脂为例）OH型：RN(CH3)3OH＋肽+TFA-=RN(CH3)3TFA+肽+OHCl型：RN(CH3)3Cl＋肽+TFA-=RN(CH3)3TFA+肽+ClOH型树脂交换后溶液pH值将升高，故一般来说，弱碱性树脂为了使其离子化，应采用Cl型。2.根据离子交换剂的材料也可分为两类：（1）第一类是包含合成树脂骨架的多孔弹性颗粒，通常是苯乙烯和二乙烯苯共聚而成的聚苯乙烯树脂。这类树脂常用于分离离子型小分子（如多肽，糖磷酸脂、抗生素等）。（2）第二类离子交换剂是多糖类骨架的离子交换树脂，它是通过对先存在于多糖上的羟基基团进行化学改性制得的。目前广泛应用在离子交换分离生物大分子上。离子交换树脂的性能评价离子交换树脂一般不溶于水、一般的酸碱溶液和有机溶剂，是一种具有良好化学稳定性的高分子聚合物。同时，离子交换树脂必须具备一定的理化性能。1．外观大多数商品树脂多制成球形，其直