DB31_T 955-2022 猪圆环病毒3型实时荧光PCR 检测方法.docxVIP

ICS11.220CCSB41

上海市地方

标准

DB31/T955—2022代替DB31/T955—2015

猪圆环病毒3型实时荧光PCR检测方法

Real-timePCRmethodfordetectionofporcinecircovirustype3

2022-11-09发布2023-02-01实施

上海市市场监督管理局

发布

I

DB31/T955—2022

目次

前言 Ⅲ

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4原理 1

5仪器设备 1

6耗材 2

7试剂 2

8样品采集与处理 2

9DNA提取 3

10实时荧光PCR检测 3

附录A(规范性)溶液配制 5

附录B(规范性)引物和探针 6

附录C(规范性)DNA提取方法 7

附录D(规范性)荧光PCR反应体系 8

DB31/T955—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件代替DB31/T955—2015《猪圆环病毒2a/2b亚型实时荧光PCR检测和分型方法》,与

DB31/T955—2015相比，除编辑性改动外，主要技术变化如下：

——更改“缩略语”为“术语和定义”(见第3章，2015年版的第3章);

——增加了耗材(见第6章);

——更改了试剂(见第7章，2015年版的第6章);

——增加了粪便样品采集方法(见第8章);

——删除了注意事项(见2015年版的第9章);

——更改了附录A(见附录A,2015年版的第6章);———增加了引物和探针(见附录B);

——更改了DNA提取方法(见附录C,2015年版的附录A);——增加了荧光PCR反应体系(见附录D)。

本文件由上海市农业农村委员会提出并组织实施。

本文件由上海市畜牧业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：上海市动物疫病预防控制中心。

本文件主要起草人：刘健、杨德全、葛菲菲、李鑫、白艺兰、沈海潇、赵洪进、王建、杨显超、周锦萍、鞠厚斌、李凯航、卢军、葛杰、桂亚萍。

本文件所代替文件的历次版本发布情况为：——DB31/T955—2015。

H

1

DB31/T955—2022

猪圆环病毒3型实时荧光PCR检测方法

1范围

本文件规定了猪圆环病毒3型实时荧光PCR检测方法的仪器设备、耗材、试剂、样品采集与处理、DNA提取和实时荧光PCR检测等技术要求。

本文件适用于猪圆环病毒3型核酸检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

猪圆环病毒3型porcinecircovirustype3;PCV3

属于圆环病毒科圆环病毒属新发猪病毒性传染病病原，表现为猪皮炎与肾病综合征的临床病症。3.2

开放阅读框openreadingframe;ORF

从起始密码子开始，是DNA序列中具有编码蛋白质潜能的序列，结束于终止密码子连续的碱基序列。

3.3

循环数阈值cyclethresholdvalueCt值

每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环数。

4原理

根据PCV3ORF1序列，设计相应的引物和探针，建立实时荧光PCR检测方法。

5仪器设备

5.1荧光PCR仪。

5.2研钵或组织研磨器。

5.3干热灭菌器。

5.4高速台式冷冻离心机：可控温至4℃,离心力可达12000r/min以上。

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DB31/T955—2022

5.5水浴锅。

5.6普通冰箱：2℃~8℃。

5.7普通冰箱：-18℃以下。

5.8超低温冰箱：-70℃以下。

5.9可调移液器：0.2μL~2μL。

5.10可调移液器：0.5μL～10μL。

5.11可调移液器：10μL~100μL。

5.12可调移液器：20μL~200μL。