多聚酶链式反应扩增DNAppt课件.pptxVIP

DNA多聚酶链式反应扩增DNA片断;1、多聚酶链式反应的概念;1、DNA分子的组成成分和结构;2、DNA分子复制的过程;解旋酶;DNA双链;（二）、PCR的反应过程;DNA双链反向平行;1、DNA分子的3′端与5′端

-OH端为3′;磷酸基团的末端为5′。

2、DNA分子由两条反向平行的脱氧核苷酸链根据碱基互补配对原则形成氢键连接而成。;基本单位;;实验操作步骤：

（准备）按配方将所需试剂摆放在实验桌上

（移液）用微量移液器按配方在微量离心管中依次加入各组分

（混合）盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁

（离心）将微量离心管放在离心机上

（反应）将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序;反应周期;以便增加大分子模板DNA彻底变性的概率;;;;（1）变性：当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链。

（2）复性：温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。

（3）延伸：温度上升到72℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸(A，T，C，G)在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。;（1）PCR循环--变性;（1）PCR循环--变性;（1）PCR循环--变性;（2）PCR循环—复性;（3）PCR循环—延伸;（3）PCR循环—延伸;（3）PCR循环—延伸;（3）PCR循环—延伸;4、循环特点：;三、实验步骤：;四、操作提示：;五、结果分析与评价;注意事项：详见操作提示;实验结果与分析;六、课题延伸;PCR技术与体内DNA复制的区别：;练习(课堂检测);练习(教材P63);练习巩固;2、DNA的合成方向总是从子链的哪一端向哪一端延伸？;4、做PCR使用的微量离心管、枪头、缓冲液及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是

A反复洗涤B不怕外源DNA污染

C高压灭菌D在-20℃储存;再见;移液器;离心管;离心机;PCR仪