《蝴蝶兰组培育苗技术规程》.docx

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DBFORMTEXT4414

FORMTEXT梅州市地方标准

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FORMTEXT蝴蝶兰组培育苗技术规程

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FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT??梅州市市场监督管理局???发布

DB4414/T—2023

前??言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由梅州市农业农村局提出并归口。

本文件起草单位：梅州市农林科学院花卉研究所。

本文件主要起草人：陈瑞珍、宋勇强、李翠玲、李艳梅、林新莲、刘文泉、黄静兰、钟云东、罗小忠。

PAGE

PAGEI

蝴蝶兰组培育苗技术规程

1范围

本文件规定了蝴蝶兰组培育苗的仪器设备、培养基配制、外植体准备、外植体接种、组培苗分级、炼苗、档案管理。

本文件适用于梅州地区蝴蝶兰组培苗的生产。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程。

DB42/T1116观赏花卉蝴蝶兰盆花设施栽培生产技术规程。

3仪器设备

3.1灭菌设备

高压灭菌锅，小推车，不锈钢筐，微波炉等。

3.2洗涤设备

水槽，塑料筐，塑料桶，晾瓶架，毛刷等。

3.3称量设备

电子精密天平，电子天平等。

3.4药品室设备

药品柜、通风橱、易制爆储存柜、易制毒储存柜、冰箱等。

3.5配置室设备

纯水机，试管架，三角烧瓶，烧杯，量筒，组培瓶，剪刀，容量瓶，移液管，药勺，玻璃棒，实验台等。

3.6接种室设备

超净工作台，镊子消毒器，臭氧发生器，紫外线杀菌灯，工作服，接种专用盘，解剖刀，镊子，接种针，乳胶手套，口罩，鞋套，专用记号笔，脱脂棉，脱脂纱布等。

3.7培养室设备

培养架，紫外线杀菌灯，温湿度计，定时器，臭氧发生器等。

4培养基配制

4.1水质要求

培养基配制用水，水质应符合NY/T2306-2013表B.1(续)的要求。

4.2配制

按照表A.1蝴蝶兰组织培养配方表配置相应培养基，定容后搅拌均匀，以0.1mol/L的NaOH、HCl溶液调整pH值。

4.3分装

培养基煮沸后分装至培养瓶中，诱导培养基30ml~50ml，增殖培养基30ml~50ml，生根培养基50ml~70ml，复壮培养基30ml~50ml。标明编号、配制日期等信息。

4.4灭菌

高温高压灭菌压力9.8×104Pa~10.8×104Pa，温度(121±2)℃，灭菌时间15min~25min。

4.5储存

灭菌后的培养基按编号归类层叠堆放，平置冷却，存储温度不高于25℃，尽量避光避粉尘，存储时间不超过30d。

5外植体处理

5.1外植体采集

在温室大棚采集生长健壮、无病虫害、观赏性状好的蝴蝶兰花梗作为外植体材料，采集前，宜选择晴朗天气，控水5d~7d。

5.2预处理

用消毒过的剪刀将花梗分节剪取，剪成1cm~2cm的小段，每段保留1个节间，放置装有洗衣粉溶液的瓶子中浸泡3min~5min后，用自来水冲洗至无泡沫出现，然后用蒸馏水冲洗2次。

5.3消毒

在接种室的超净工作台操作，先倒入75%酒精至放置外植体的烧杯，轻轻摇晃烧杯，30s后倒掉烧杯中的酒精，再用无菌水清洗烧杯中外植体2次，倒入0.1%氯化汞溶液浸泡消毒，消毒时间根据不同品种、不同成熟性的花梗而定，一般8min~40min，消毒完成后无菌水清洗外植体4次~6次。

6外植体接种

6.1接种前准备

开启超净工作台的紫外灯和风机30min，开启镊子和解剖刀消毒器。操作人员进入接种室前首先清洗双手，再换上个人专用的工作服、鞋套、帽子等。操作台、器具和双手用75%酒精消毒。

6.2诱导培养

6.2.1接种

采用诱导培养基（见表A.1），切除消毒完成的外植体两端，顶段平切，底端斜切，长度1cm~1.5cm，插入诱导培养基，使腋芽垂直于培养基，应均匀地分布在培养瓶中，每个培养瓶接种3个~5个外植体。

6.2.2诱导培养条件

接种完成后转入