酶促反应动力学.PPTVIP

a=1+[I]/KI2．非竞争I（non-competitiveI）Ks=KsKi=KiEISKsEI+SKiKiII++E+PkpESKsE+SNoncompetitiveinhibition[ES][Et]Vmv=[ES][E][S]Ks=[EI][E][I]Ki=[S])Vm/(1v[S]Km+×+=Ki[I][EIS][ES][I]Ki=Ks[EIS][EI][S]=非竞IKm不变，Vmax下降[Et]=[E]+[ES]+[EI]+[EIS]mV1Vm11v1[s]-1Km3．反竞争IKEISE+SESE+P+IKisI不与游离酶结合，却与ES结合，结合后不能释放P=KiKs[E][S][I]Ki[I]Ks[E][S]×[Ki][ES][I][ESI]==\[ESI][ES][I]Ki=[ES][E][S]Ks=[S])Ki[I]Km/(1[S])Ki[I]Vm/(1v++×+=[ES][Et][ES]Vmv[E][ES][ES]++==各种方法比较：A、（1）、（5）方法常用，方法（1）肉眼判断最不可靠。B、（2）、（3）、（4）三种方法的优点是数点在坐标图中的分布较均匀，v不取倒数，对v误差较大的合适；缺点是X，Y轴包含两个变量。二、[E]的影响v[E]直线v=k2[Et][S]Km+[S]条件：?[S][E]?初v?最适条件酶量v12345?酶不纯（抑制剂）?[S]太小?作用时间太长?辅因子丢失?酶蛋白变性三、抑制剂（一）概念：造成v下降①酶-蛋白质变性②去激活作用③抑制作用——必需基团性质改变v下降（二）抑制作用的分类类型不可逆可逆专一（Ks、kcat）非专一竞争性非竞争性反竞争性混合可逆与不可逆I的鉴别：①是否用透析法除去②不同量的酶，加入等量的I和S，使体积相等正常不可逆可逆[E]vV[E][E]V不可逆可逆（三）不可逆抑制作用（irreversibleinhibition）1.非专一不可逆抑制酰化剂烷化剂氧化剂还原剂亲电子试剂E-SH+ICH2COOHE-S-CH2-COOH+HI（ICH2CONH2）E-Ser-OH+DFP-SH-S-S-2．专一性不可逆I（1）Ks——亲和标记试剂Ks型抑制剂的特点：?与S结构类似?有活泼基团 胰凝乳蛋白酶——TPCK胰蛋白酶————TLCK丙酮酸羧化酶——溴代丙酮酸：（E—SH）判断抑制是否发生在活性中心：①抑制剂的作用是化学计量的抑制后，活性全部丧失。②Sor竞I，有保护作用。③用简单方法使酶失活，失活后不再与I反应。（2）kcat型：特点：①具有天然S的类似结构②本身也是酶的Si，可被酶催化③kcat–抑制剂具有潜伏性反应基团，可因酶的催化而暴露or活化，并作用于酶的活性中心。即——Si经催化后才能形成酶的不可逆I∴Si（kcat-I）被称为“自杀性底物”suici