艾滋病抗病毒治疗的耐药检测方法.pptVIP

那些因素促使耐药性病毒株出现?药物配伍不当—药代显著不同药物配伍3.024483612时间(小时)药物浓度潜在病毒复制区IC90IC50最后一次用药第一天第二天单药治疗S.Tayloretal.11thCROIAbs131那些因素促使耐药性病毒株出现?—细胞周期依赖性药物AZT,D4T(活化期细胞)DDI(静止相细胞)蛋白酶抑制剂(活化期细胞)—非细胞周期依赖性药物3TC,FTC,AbacavirTenofovirNNRTIs3.药物配伍不当—缺乏对某一时相细胞内病毒抑制或抑制不足那些因素促使耐药性病毒株出现?4.其他因素—胃肠道吸收不好：呕吐，腹泻；—随意间歇服药；—与中药或其他药物同时服用。什么是好治疗方案?—能快速抑制病毒；—不易产生耐药性；—可长期维持；耐药性分类原发性耐药(Primaryresistance):病人在接受抗病毒治疗前产生了药物作用靶点的变异，或者感染了耐药毒株，均降低抗病毒药物的敏感性。在已经开展HAART的国家普遍存在，感染了耐药毒株的病人很容易引起药物治疗失败。继发性耐药(Secondaryresistance):病人已经接受了抗病毒治疗并产生治疗失败，在药物的选择压力下产生的耐药。破坏核苷类似物结合病毒DNA的能力M184V突变:RT酶第184位密码子的氨基酸由蛋氨酸(M)变成为缬氨酸(V)。拉米夫定(Lamivudine)Q151Mmutation:在HIV-1中出现低于5%；HIV-2中出现频率较高。核苷和核苷类似物耐药机制：切除病毒DNA链末端的核苷类似物Thymidineanaloguesmutations:突变引起ATP或者焦磷酸介导的切除DNA链3‘末端核苷类似物。核苷和核苷类似物耐药机制：耐药机制：非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)突变降低了抑制剂对酶的结合力。不同于核苷逆转录酶抑制剂，其单一突变就能导致高度耐药。如K103N、Y181C。耐药机制：K103N突变的机制耐药机制：HIV蛋白酶由两个同样的蛋白质链组成。这两个蛋白质链在一起就如同核桃的两半，而蛋白酶的活性位点就在两个半壳的中间。蛋白酶抑制剂突变点的表示方法：基因的突变通常以字母－数字－字母的书写方式来表示，第一个字母代表野生型病毒株特定密码子处的氨基酸，第二个字母代表在特定密码子处替换了的氨基酸，中间数字表示突变点的位置。例如：逆转录酶（RT）K103N的突变表示逆转录酶第103位密码子的氨基酸由天冬酰胺（K）变成为赖氨酸（N）。如何检测耐药株：目前耐药性检测有两种方法，即表型检测及基因型检测。表型检测通过用药期间的病毒培养进行，而基因型检测则通过分子生物学方法检测与耐药性相关的病毒基因突变。基因型检测的费用较低，技术也相对容易，可在样品收集后1～2周得到结果，但分析基因型耐药检测时，需要掌握大量相关知识，如突变与抗病毒药物及其它药物的交叉耐药等，才能对结果进行正确的分析。表型检测可以直接检测病毒的耐药性，但操作复杂、耗时，技术要求高，且非常昂贵，因此目前国际上广泛应用于临床的是基因型耐药检测。如何检测耐药株：TranslationintolinearstringofaminoacidsFoldingintofunctionalproteinHIVRNA表型检测基因型检测基因型和表型检测检测中注意事项:—在病人仍在治疗失败的方案上收集样品，可保证耐药株占总病毒量的20%以上；—病毒载量1000时,可出现假阴性。我国HIV耐药性本底抽样调查结果对于RT基因区共完成对21个省区共143个样本的测序，仅有2例发现具有轻微耐药（占总样本数的1.4%）对于蛋白酶基因区本次调查共完成20个省区168个样本的分析，仅发现有2例样本（占总样本数1.21%）具有轻微耐药。结论：当前我国HIV耐药性处于较低状态，对于几乎所有药物敏感，我国抗HIV药物的使用如果有计划的开展，应当会有较好的效果，但应加强治疗依从性促进工作和耐药毒株的监测工作。HIV基因型耐药性检测

（序列测定法）检测流程病人血浆标本HIVRNA病毒cDNAHIVRT和PR基因片段序列测定结果解释RNA提取逆转录PCR扩增特定的解释系统标本新鲜EDTA抗凝血浆，或-80℃保存，避免反复冻融病毒RNA提取（Qiagen公司试剂盒）收集RNA备用优点：操作简便、快速、得率高裂解标本，灭活RNA酶加到离心柱中，RNA与硅胶膜结合洗两次，去除杂质用无RNA酶的