新型吡啶并咪唑类CDC25小分子抑制剂的抗肿瘤作用及机制研究.pdf

新型吡啶并咪唑类CDC25小分子抑制剂的抗肿瘤作用及机制研

究

研究背景：全世界每年死于癌症的病人数以千万计,癌症严重威胁着人类的

健康和生存。虽然每种恶性肿瘤可能由不同的病因引起并具有不同的症状,但是

它们最重要的共同特征就是肿瘤细胞的恶性增殖。

而细胞增殖又需要通过细胞周期来进行调控。在细胞周期调控中起着核心作

用的是CDK/Cyclin复合物,CDK/Cyclin的活性受多种因子的调控,如Weel,CDC25

等。

CDC25是一种双特异性蛋白磷酸酶,它可以去磷酸化CDK/Cyclin复合物从而

使其活化,参与细胞周期调节并调控应对DNA损伤,在正常的细胞周期中具有重

要的作用。近来很多研究表明,CDC25在多种癌症组织中均呈现过表达,如结肠癌,

肺癌,胃癌,乳腺癌,前列腺癌,肝癌等等,其过表达往往与肿瘤生成及癌症的预后

不良有关。

由于CDC25对细胞周期的调控作用以及在癌细胞中的异常表达,它已成为一

个热门的癌症治疗靶点。近年来,许多类型的化合物被发现并证明在体外具有抑

制CDC25磷酸酶活性的作用。

这些化合物主要是以维生素K3及其衍生物为代表的醌源类化合物,另外还

有喹啉二酮类化合物及萘醌类化合物等等。它们共同的特征是具有醌类结构,在

细胞实验中可以诱导G1/S期和G2/M期的细胞周期阻滞。

但是它们的效价可能因为醌还原酶而降低,并且严重的毒副作用和耐药性也

限制了其开发潜力。故开拓思路、寻找新结构、新代谢途径的CDC25抑制剂势在

必行。

杂环化合物在有机药物中占有重要地位。大量的、结构多样性的杂环化合物

的合成是发现具有生物学功能的化合物的源泉,尤其在抗肿瘤新药发现中具有重

要的地位(宋宇宁,等,CurrPharmDes.2013;19(8):1528-48.)。

通过对近几年文献调研发现,芳杂环巯乙酸衍生物是具有广泛的生物活性的

优势杂环结构,引起了我们的研究兴趣(宋宇宁,

等,Med.[Chem.Commun.2013;4:810-816;宋宇宁,等,CurrPharm

Des.2013;19(40):7141-54.)。它们可以作为构成药效团的基本结构母核,通过刚

性杂环及柔性巯烷链的协调匹配以适合药物特殊作用靶点的空间要求；还可以作

为活性取代基或环系的组成部分而产生相应的生物活性；同时具有较好的体内代

谢稳定性及生物相容性。

因此它们近期被广泛应用于新型抗肿瘤先导化合物的发现及结构优化。根据

上述分析及我们近几年在该类杂环化学及生物学方面的研究基础,为发现结构新

颖的CDC25抑制剂,构建了含有60余个杂环巯基烷烃衍生物的小型化合物库,并

对其进行活性筛选,发现嘧啶并咪唑巯乙酮类及嘧啶并咪唑巯乙酰胺类化合物这

两大类结构具有较好的抗肿瘤活性,根据其结构特点,推测其可能是潜在的

CDC25抑制剂。

本文对筛选出的6个化合物(CHEQ-1～CHEQ-6)进行了进一步的活性测定,对

其中药效最为显著的CHEQ-2(1-(3,4-二羟基苯基)-2-(1-(2,4,6-三甲基

苯)-1H-咪唑[4,5-c]吡啶-2-巯基)乙酮),探讨了其对MCF-7、HepG2及HT-29三

种细胞的体外抗肿瘤活性及其机制,并对其安全性及体内抗肿瘤活性进行了初步

评价。研究目的：本研究对6个新型吡啶并咪唑巯烷类化合物进行评价,并对其

中活性最佳的CHEQ-2的抗肿瘤活性进行进一步的研究,探讨其作用机制,对发现

高效低毒且具有自主知识产权的新型CDC25抑制剂具有重要意义.实验方法：以

OMFP为底物测定体外CDC25的磷酸酶活性,评价该系列化合物对CDC25A和

CDC25B体外酶活性的抑制作用。

选用人结肠癌细胞HT-29和人肝癌细胞HepG2,以MTT法检测了该系列化合

物对肿瘤细胞增殖的抑制作用。对筛选出的活性较好的CHEQ-2,进一步测定其对

其它多种不同类型肿瘤细胞生存率的影响,并与阳性化合物VK3以及XDW-1进行

比较。

用PI染色配合流式细胞术检测CHEQ-2对MCF-7、HepG2以及HT-29的细胞

周期的影响,并用Westernblotting法对周期相关蛋白的表达进行检测。

Hochest33342染色法和流式细胞术AnnexinV-FITC/PI