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MiseqSystem文库变性和稀释指南

摘要

本指南介绍了对Tumina@MiSeq@system上进行测序的文库进行变性和稀释方法，同时介绍了用作测

序控制PhiX文库的制备说明。

耗材和设备

耗材

和名称供应商

HTI(HybridizationBuffen,thawedandprechilledIUumina提供的MiSeqReagentKit

TuminaPhiXControl,Catalog#FC-110-3001liumina(选择)

1.0NNaOH,molecularbiology-grade一般实验窜供应商

Tris-Cl10mM,PH8.5with0.19%Tween20一般实验宣供应商

设备

名称供应商

本_SciGene,catalog#1057-30-O(115Vj,orequivalent

hybex微型鲜化器(HybexMicrosampleIncubator)

SciGene,catalog#1057-30-2(230Y),orequivyalent

].5ml的离心管SciGene,catalog#1057-34-0,orequivalent

下

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工试剂准备

11准备新鲜稀释的NaOH

妨取8$00hLaberatory-gradewater至1.5ml微量离心管小

信添加200hL的1ONNaOH，获得Iml含02NNaOH溶液

令征倒1.5ml的离心管数次泥匀

二注:

w始终准备新鲜稀释的NaOH用十变性文库以便簇牛成。

w”为防止小的移液误差影响最终的NaOH浓度，准备全少1ml新鲜稀释的NaOH。

w”为获得最佳结果，请在变性和稀释文库之前解冻测序试剂。参考MiSeqSystemUserGuide(part

#

12准备HT1

心将-25C一-155C储存的HTI移全室温溶解

妨待HTI溶解打储存至2C一8eC冰箱中备用

1.3稀释变性PhiX质控

名称最终PhiX浓度

MiSeqReagentKitv3将变性PhiX对蜡稀释至20pM，对于v3试剂能够产生最住钱密度

MiSeqReagentKity2将变性PhiX对照稀释至12.5pM，对-]v2试剂能够产生最件艇密度

1.3.1称释PhiX文库至4nM

仿取2h170nwfP光文库至1.5ml的微量离心管中

仿添310Tris-CHPH8SwiD19%Tveen20

13.2变性4nMPbiX文库

妨向上述淮备好的4nMPhiX文库中加入5hl已准备好的D2NNaOH

仿知暂流涡混匀后280xg离心Imin

令室温孵育Smin

仿添加990呈准备好的HTI，获得Iml含20pM变性的Ph