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CHO细胞无血清培养基的筛选与优化

在生物制药领域，CHO细胞（ChineseHamsterOvaryCell，中国仓

鼠卵巢细胞）因其能够高效表达重组蛋白而被广泛应用。然而，传统

的含血清培养基存在诸多问题，如血清成分复杂且批次间差异大，易

引入外源病毒和支原体污染等。因此，开发和优化CHO细胞无血清培

养基成为了提高生物制品质量和安全性的关键环节。

一、CHO细胞无血清培养基的重要性

血清在细胞培养中曾被广泛使用，但其存在的问题不容忽视。血清

中的成分复杂且不稳定，这使得细胞培养过程难以控制和标准化。不

同批次的血清质量差异较大，可能影响细胞的生长、代谢和产物表达。

此外，血清中可能携带的病毒、支原体等污染物会给生物制品带来潜

在的安全风险。

相比之下，无血清培养基具有明显的优势。它的成分明确且稳定，

便于质量控制和优化。无血清培养基可以减少外源污染物的引入，提

高生物制品的安全性。同时，它能够为细胞提供更适宜的生长环境，

促进细胞的生长和产物表达，从而提高生产效率和产品质量。

二、筛选CHO细胞无血清培养基的方法

1、基础培养基的选择

首先需要选择合适的基础培养基作为起点。常见的基础培养基如

DMEM（DulbeccosModifiedEagleMedium，杜氏改良伊格尔培养基）、

RPMI1640等，它们在营养成分和离子浓度等方面有所不同。需要根

据CHO细胞的特性和培养需求，初步筛选出几种可能适用的基础培养

基。

2、添加剂的筛选

在基础培养基的基础上，需要添加各种营养成分、生长因子、激素

等添加剂来满足CHO细胞的生长和代谢需求。例如，胰岛素、转铁蛋

白、乙醇胺等对于细胞的生长和存活至关重要。通过单独或组合添加

这些添加剂，并检测细胞的生长情况、代谢指标和产物表达水平，来

筛选出最优的添加剂组合。

3、化学成分的优化

除了添加剂，培养基中的化学成分如氨基酸、维生素、无机盐等的

浓度和比例也需要进行优化。可以采用单因素实验或响应面分析法等

方法，研究不同化学成分对细胞生长和产物表达的影响，从而确定最

佳的化学成分组成。

4、高通量筛选技术的应用

随着技术的发展，高通量筛选技术在培养基筛选中发挥了重要作用。

例如，微流控芯片技术可以在微小的空间内同时进行多个培养基配方

的筛选，大大提高了筛选效率。此外，自动化细胞培养和检测系统能

够快速、准确地获取大量的细胞生长和代谢数据，为培养基的筛选提

供有力支持。

三、优化CHO细胞无血清培养基的策略

1、细胞代谢分析

通过对细胞代谢过程的分析，了解细胞在不同培养条件下对营养物

质的摄取和代谢产物的生成情况。例如，检测葡萄糖、谷氨酰胺的消

耗速率以及乳酸、氨等代谢产物的积累情况。根据代谢分析的结果，

可以针对性地调整培养基的成分和浓度，优化细胞的代谢环境，提高

细胞的生长和产物表达效率。

2、培养条件的优化

除了培养基成分，培养条件如温度、pH值、溶氧水平等也会影响

细胞的生长和产物表达。需要对这些培养条件进行优化，以配合无血

清培养基的使用。例如，适当降低培养温度可以减少细胞的代谢负担，

提高细胞的存活率和产物表达水平。

3、多参数综合优化

在优化过程中，需要综合考虑多个参数的影响。可以采用统计学方

法和实验设计，如正交实验设计、中心组合设计等，同时对培养基成

分和培养条件进行优化，以获得最佳的培养效果。

4、反馈控制策略

在细胞培养过程中，可以实时监测细胞的生长状态和代谢指标，并

根据这些信息实时调整培养基的成分和培养条件。例如，当细胞生长

缓慢时，可以增加某些营养物质的浓度；当代谢产物积累过多时，可

以调整培养条件促进其排出。

四、CHO细胞无血清培养基筛选与优化的挑战

1、细胞的适应性

CHO细胞在从含血清培养环境转换到无血清培养环境时，可能会

出现不适应的情况，导致生长缓慢、存活率降低和产物表达下降。需

要通过逐步降低血清浓度等方法，对细胞进行驯化，提高其对无血清

培养基的适应性。

2、培养基成分的复杂性

无血清培养基中的成分众多，且相互之间存在复杂的相互作用。如

何准确理解和把握这些成分之间的关系，以及它们对细胞生长和产物

表达的影响，是筛选和优化过程中的一大难题。

3、成本问题

一些优质的添加剂和