生物制药综合实验讲义.pdfVIP

操千曲尔后晓声，观千剑尔后识器。——刘勰

实验一银杏叶总黄酮的提取及测定

1实验目的（1）掌握银杏叶中黄酮的提取方法；

（2）掌握银杏叶中黄酮的含量测定。

2实验原理

近几年来，随着对黄酮类化合物研究的日益深入与重视，黄酮类化合物提取

技术的发展也得到了促进。目前提取黄酮类化合物的方法主要包括有机溶剂浸提

法、超声波提取法、超临界流体萃取法、微波提取法和酶提取法等。本实验采用

有机溶剂浸提法提取银杏叶总黄酮，运用芦丁法测定银杏叶总黄酮含量。

3实验材料、试剂和主要仪器

3.1实验材料与试剂

银杏叶，芦丁标准品，无水乙醇，NaNO，Al(NO)，NaOH。

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3.2主要仪器

移液枪，圆底烧瓶，水浴锅，旋转蒸发仪，布氏漏斗，容量瓶，10ml刻度

管，酶标仪。

4实验步骤

4.1银杏叶黄酮的提取

称量2g银杏叶放入圆底烧瓶中，加入100ml80%乙醇于圆底烧瓶中，于80℃

下热回流提取2h，用漏斗过滤，弃渣留滤液，滤液用旋转蒸发仪浓缩并转入100

ml容量瓶中，用30%的乙醇定容，摇匀，供检测使用。

4.2芦丁标准曲线的绘制

用80%乙醇配制0.03%（0.3mg/ml）的芦丁标准储备液。分别吸取刚配制好

的芦丁标液0.0，15.6，31.3，62.5，125，250，500μl置于7个1.5mlEP管中，

用80%的乙醇补足至0.5ml，依次编号0~6，加入30μlNaNO2（5%），摇匀静置

6min后加入30μlA1(NO)（10%），摇匀静置6min后再加入400μlNaOH（4%），

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混匀，用80%乙醇补至1ml，静置l5~20min，以0号试管为空白，用酶标仪在

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510nm波长处测定吸光度，以吸光度(A)为横坐标，芦丁浓度(μg/ml)为纵坐标，

绘制标准曲线。

4.3总黄酮含量的测定

做2个样，取适量提取液置于1.5mlEP管中，用80%乙醇补充至0.5ml，

加入30μlNaNO（5%），摇匀静置6min后加入30μlA1(NO)（10%），摇匀静

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置6min后再加入400μlNaOH（4%），混匀，用80%乙醇补至1ml，静置l5~20

min，以0号试管为空白，用酶标仪在510nm波长处测定吸光度。将样品的OD

值带入芦丁标准曲线算得黄酮含量。

Notice：选取吸光值在标曲范围内（或最接近标曲）的样品吸光值计算银杏黄酮

提取液的浓度。

银杏叶总黄酮含量（%）=银杏黄酮浓度×提取滤液的体积/2g

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实验二、云芝多糖的制备及测定

一、实验目的：掌握云芝菌株的活化与培养；

掌握还原糖和总糖的测定方法与原理。

二、实验原理

糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮

(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在6