MDA,SOD,CAT及POD活性的测定.pdf

学而不知道，与不学同；知而不能行，与不知同。——黄睎

叶绿素含量采用无水乙醇的方法测定

超氧化物歧化酶SOD活性采用邻苯三酚自氧化法测定

过氧化物酶POD活性采用愈创木酚法测定

过氧化氢酶采用过氧化氢法测定

丙二醛采用硫代巴比妥酸法测定

蛋白质含量采用考马斯亮蓝法每次测定重复3次，取平均值

测定方法

一．SOD，CAT及POD活性的测定

分别取0.4ｇ材料于预冷的研钵中，加入8ml预冷的50mmol-1磷酸缓冲液（pH7.8）（甲

液：取Na2HPO435.9g，加水溶解，并稀释至500mL乙液：取NaH2PO42.76g，加水溶解，

并稀释至100mL取上述甲液91.5mL和乙液8.5mL，混合摇匀即得。先加2ml,在冰浴下研

磨成匀浆后，将匀浆转入10ml离心管，再用6ml冲洗），10000rpm离心15min，取上清液

定容至10ml后于4℃保存。上清液用于可溶性蛋白质含量、SOD活性及POD活性的测定。

SOD活性测定

1.显色反应取5mL指形管（要求透明度好）4支，2支为测定管，另2支为对照管，按

表47–1加入各溶液。混匀后，给1支对照管照上比试管稍长的双层黑色硬纸套遮光，与

其他各管同时置于4000lx日光灯下反应20-30min(要求各管照光情况一致，反应温度控制

在25～35℃之间，使酶活性高低适当调整反应时间)。

当样品数量较大时，可在临用前根据用量将表47–1中各试剂(酶液和核黄素除外)按比

例混合后一次加入2.65mL，然后依次加入核黄素和酶液，使终浓度不变。

表47-1各溶液显色反应用量

试剂酶）用量(mL)终浓度(比色时)

0.05mol/L磷酸缓冲液1.5

130mmol/LMet溶液0.313mmol/L

750μmol/LNBT溶液0.375μmol/L

100μmol/LEDTA-Na液0.310μmol/L

2

20μmol/L核黄素0.32.0μmol/L

酶液0.12支对照管以缓冲液代替酶

学而不知道，与不学同；知而不能行，与不知同。——黄睎

液

蒸馏水0.5

总体积3.3

3.SOD活性测定

至反应结束后，用黑布罩盖上试管，终止反应。以遮光的对照管作为空白，分别在560nm

下测定各管的OD值，计算SOD活性。

3.结果计算

已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活性单位表示，按下式计算SOD

活性。SOD总活性[u/g(FW)]=

式中：SOD总活性以酶单位每克鲜重表示。

比活力单位以酶单位每毫克蛋白表示。

ACK——照光对照管