分子克隆操作技术注意事项.docx

分子克隆操作技术留意事项

一、引物设计

设计模板：基因过表达的设计模板为mRNA〔依据基因名称和样品种属从NCBI查询〕,启动子〔转录调控区域〕的设计模板为基因组DNA片段〔依据基因名称和种属从UCSC查询，并在NCBI核实序列〕，DNA甲基化分析

〔CpG岛，依据基因名称和种属从UCSC查询，并在NCBI核实序列〕；

设计软件：VectorNTI用于设计过表达引物，VectorNTI用于设计启动子〔转录调控区域〕克隆引物；Methprimer用于设计DNA甲基化分析引物〔BSP,MSP〕

5’和3’端的酶切位点和保护性碱基

所用的载体的多克隆位