猪睾丸克隆细胞系及其生产猪瘟活疫苗的方法 .pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN102965332A

(43)申请公布日2013.03.13

(21)申请号CN201110391978.1

(22)申请日2011.11.30

(71)申请人普莱柯生物工程股份有限公司

地址471000河南省洛阳市高新区凌波路5号

(72)发明人张许科孙进忠

(74)专利代理机构北京华夏正合知识产权代理事务所(普通合伙)

代理人韩登营

(51)Int.CI

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

猪睾丸克隆细胞系及其生产猪瘟活

疫苗的方法

(57)摘要

本发明提供的一种高感染猪瘟病毒

的猪睾丸克隆细胞株ST-B2，保藏号为

CCTCCNO.C2011101。以及该猪睾丸克隆

细胞的制备方法，包括以下步骤：1)将猪

睾丸细胞进行有限稀释进行细胞克隆和亚

细胞克隆，获得亚细胞克隆株；2)选择对

猪瘟病毒感染率最高的猪睾丸细胞的亚克

隆株即为猪瘟病毒的高感染性猪睾丸克隆

细胞。本发明还提供了上述猪睾丸克隆细

胞制备高滴度的猪瘟病毒液和猪瘟活疫苗

的方法。本发明的猪睾丸克隆细胞，对猪

瘟病毒感染率高，使用该猪睾丸细胞系ST

克隆细胞株ST-B2以带毒传毒的方法生产

的猪瘟疫苗，病毒滴度高，不易受到

BVDV的污染，疫苗纯净性好；带毒传毒

的方法使得每次复苏的细胞可以持续传代

达至少15代，减少了复苏细胞与接毒的次

数，简化了生产工艺，提高了生产效率。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种猪瘟病毒的高感染性猪睾丸克隆细胞，其特征在于，保藏号为

CCTCCNO：C2011101。

2.一种如权利要求1所述的猪睾丸克隆细胞的制备方法，其特征在于，

包括以下步骤：

1)将猪睾丸细胞进行有限稀释进行细胞克隆和亚细胞克隆，获得亚细

胞克隆株；

2)选择对猪瘟病毒感染率最高的猪睾丸细胞的亚克隆株即为猪瘟病毒

的高感染性猪睾丸克隆细胞。

3.根据权利要求2所述的使用猪睾丸克隆细胞的制备方法，其特征在

于，所述的步骤1)为使用未被病毒感染的猪睾丸细胞，经胰蛋白酶

消化为单细胞后进行梯度稀释，分别在37℃5％COsub2/sub的条件下

培养于96孔细胞培养板中培养至肉眼可见细胞克隆后，进行亚细胞

培养，获得亚克隆细胞株；

4.根据权利要求2所述的使用猪睾丸克隆细胞的制备方法，其特征在

于，所述的步骤2)为将猪睾丸细胞亚克隆株接种于96孔细胞培养

板中，接种猪瘟病毒于37℃5％COsub2/sub的条件下培养2h，使用

免疫过氧化酶单层细胞试验法检测感染病毒最多的细胞，选择对猪

瘟病毒感染率最高的猪睾丸细胞的亚克隆株即为猪瘟病毒的高感染

性猪睾丸克隆细胞。

5.一种使用权利要求1所述的猪睾丸克隆细胞用于高滴度的猪瘟

病毒液的制备方法，其特征在于，将权利要求1所述的猪睾丸克隆

细胞用胰酶消化后，同步接种含新鲜脾毒的细胞维持