一节免疫标记技术的基本概念.ppt

按指示标记物质划分的类型01酶免疫技术02荧光免疫技术03放射免疫技术04发光免疫技术05金免疫技术按测定方式划分的类型均相型（homogenous）非均相型（heterogeneous）均相型（homogenous）非均相型（heterogeneous）双标记均相荧光免疫测定酶扩大免疫测定技术按测定用途划分的类型A免疫测定技术免疫组化技术B第二节酶联免疫吸附试验ELISA技术的原理与方法ELISA技术的操作注意要点ELISA技术的原理与方法间接法夹心法竞争法间接法PART1夹心法PART1竞争法PART1酶标仪酶标仪ELISA技术的操作注意要点试剂器材A操作环节B合适工作浓度C第一节免疫标记技术的基本概念一、免疫标记与标记免疫的概念二、常用的免疫标记物质免疫标记与标记免疫单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，请尽量言简意赅地阐述观点。免疫标记技术：01单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，请尽量言简意赅地阐述观点。标记物与免疫活性物质的联接技术02以标记免疫物质检测相应靶物质的技术标记免疫技术：03常用的免疫标记物质类别标记物用途荧光素FITC、RB200、TRITC免疫组化镧系元素螯合物免疫分析测定放射性核素3H、14C、32P、57Gr免疫分析测定125I、131I酶HRP、AP免疫组化免疫分析测定化学发光物Luminol、lucigenin免疫分析测定金属颗粒胶体金、铁蛋白免疫组化免疫分析测定常用标记方法标记免疫物的分离与鉴定第二节酶标记技术常用标记方法1、常用酶辣根过氧化物酶（HRP）碱性磷酸酶（AP）012、标记方法戊二醛交联法过碘酸盐氧化法02戊二醛交联法(一步法）抗体-NH2+COH-（CH2）3-COH+NH2-酶01020304抗体-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶抗体-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-抗体酶-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶戊二醛交联法（二步法）STEP03STEP01STEP02COH-（CH2）3-COH+NH2-酶抗体-NH2+CHO-（CH2）3-CH=NH2-酶抗体-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶过碘酸盐氧化法OOOOOONaIO4OOOHOOOHOH+NH2抗体OOONN抗体抗体H2ON抗体NaBH4Schiff碱酶-五炭糖环标记免疫物的分离与鉴定1、分离目的：去除游离酶方法：盐析、柱层析2、鉴定抗体活性酶活性标记物纯度常用标记方法标记免疫物的分离与纯化第三节荧光标记技术常用标记方法荧光素的概念生物标记荧光素的要求常用荧光素标记原理与方法生物标记荧光素的要求具有与蛋白质共价结合的能力荧光效率高能与背景物质形成鲜明对比不影响蛋白质的生物、免疫活性标记方法安全、简便标记物稳定，易保存FITC的标记原理与方法荧光素-N=C=S+NH2-抗体01添加标题荧光素-N-C-N-抗体02添加标题HSH03添加标题RB200的标记原理与方法荧光素-SO3Na+PCl5荧光素-SO2Cl+PCl3+NaCl荧光素-SO2-NH-抗体+HCl荧光素-SO2Cl+NH2-抗