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UPLC-MS测定人血清中霉酚酸浓度的研究

胡岚岚;汤建林;周世文;刘智远;刘明;徐颖

【摘要】目的建立一种快速、准确测定人血清中霉酚酸浓度的超高效液相色谱-

质谱(UPLC-MS)测定方法.方法在血清中加入内标吲哚美辛,采用超高效液相色谱联

合质谱的方法对血清中的霉酚酸进行分离测定.结果霉酚酸在0.05～100.00

μg/mL的浓度范围内呈良好线性,r=0.9980,最低检测线为0.05μg/mL,方法回收

率大于91.2%,日内、日间变异系数均小于5%.结论该方法准确、快速、灵敏,可用

于霉酚酸的治疗药物监测、人体内药代动力学及生物等效性研究.

【期刊名称】《局解手术学杂志》

【年(卷),期】2010(019)004

【总页数】3页(P266-268)

【关键词】霉酚酸;超高效液相色谱-质谱;血清

【作者】胡岚岚;汤建林;周世文;刘智远;刘明;徐颖

【作者单位】第三军医大学新桥医院临床药理基地,重庆,400037;第三军医大学新

桥医院临床药理基地,重庆,400037;第三军医大学新桥医院临床药理基地,重

庆,400037;第三军医大学新桥医院临床药理基地,重庆,400037;第三军医大学新桥

医院临床药理基地,重庆,400037;第三军医大学新桥医院临床药理基地,重

庆,400037

【正文语种】中文

【中图分类】R979.5;Q503

马替麦考酚酯(mycophenolatemofetil)是霉酚酸(MPA)的2-吗啉代乙酯,在体内

脱脂化后形成具有免疫抑制活性的代谢物MPA,MPA选择性作用于T、B淋巴细

胞,抑制其增殖。临床上用于预防急性器官排异反应,治疗同种异体肾移植后难治性

排异反应。霉酚酸的血药浓度测定方法国内外已有报道[1-7],但以高效液相色谱分

离、荧光检测居多,且多数样品处理过程繁琐,分析时间长。本文在参考文献的基础

上采用超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)联用的方法,对血清中霉酚酸成功进行了分

离测定。

1材料与方法

1.1仪器与试剂

Waters-Acquity型超高效液相色谱质谱系统(配QBA235型TQ检测器,K

07UPA468M型SampleManager,K07UP8450M型BinaySolventManager

及Masslynxv4.1色谱管理软件);色谱柱为AcquityUPLCBEHC18(2.1mm×50

mm,1.7μm);MC-210S型电子天平(精度0.01mg);AbbottDiagnostics,Division

离心机;XH-86多用途旋涡混合器,Millipore超纯水系统。对照品为霉酚酸对照药

(批号:080816,含量99.3%),吲哚美辛内标物(含量大于等于99.3%,批号:100258-

200403),乙腈、甲醇均为色谱纯(Burdick＆Jackson公司);甲酸(纯度大于或等于

86.0%),实验用水均为Millipore超纯水。

1.2方法

1.2.1流动相的配制准确吸取1mL甲酸于1000mL容量瓶中,用超纯水定容,即

得0.1%的甲酸溶液,经0.45μm的水性滤膜过滤后于室温保存即可。

1.2.2标准溶液的配制精密称取霉酚酸和吲哚美辛0.25g,用少量去离子水溶解后,

再用去离子水稀释至50mL,配成浓度为5mg/mL的霉酚酸和吲哚美辛标准储备

液,4℃冰箱保存备用。取储备液用超纯水梯度稀释至浓度分别为100.00、80.00、

60.00、40.00、20.00、10.00、5.00、1.00、0.50、0.10、0.05μg/mL的标准

工作液,4℃冰箱保存备用。将吲哚美辛标准储备液稀释至浓度为100.00μg/mL的

工作液,4℃冰箱保存备用。

1.2.3血清样品的处理精密移取空白血清0.5mL,加入内标储备液100μl,混匀后

加入乙腈400μl,旋涡提取2min后,于11266r/min条件下离心10min,离心后吸

取上清液于另一干燥离心管中,上清液经0.22μm的滤膜过滤后进样,进样体积为

2μl。

1.2.4色谱条件AcquityUPLCBEHC18(2.1mm×50mm,1.7μm)。流动相为(乙