2024凝胶过滤层析结合液相色谱-串联质谱法测定血清中游离甲状腺激素.pdf

2024凝胶过滤层析结合液相色谱一串联质谱法测定血清中游离甲状腺

激素

基于凝胶过滤层析(GFC)进行前处理，结合液相色谱-串联质谱(1C-MS/MS)

建立了血清中游离三碘甲腺原氨酸(FT3)和游离甲状腺素(FT4)的高通量、高灵

敏检测新方法。选用Sephadex1H-20凝胶小柱对150μ1血清样本进行过滤分

离，先用Tris-HCI缓冲液(0.1mo1∕1,pH7.4)淋洗去除结合蛋白的甲状腺激素，

然后用甲醇对游离的甲状腺激素进行洗脱，采用1C-MS/MS法进行检测和定量，

并进行方法学验证。结果显示：FT3和FT4的线性相关系数(⑵均不小于0.9995,

批内及批间相对标准偏差为18%~10%,准确度为85.4%-110%基质效应为

z

85.8%-114%回收率为85.8%~107%采用该方法与平衡透析法(ED)同时检测

zo

了95份血清样本，使用IBMSPSSStatistics26和MedCaIc统计软件(v.20.0.0)

对检测结果进行配对t检验分析、PaSSingBab1ok回归分析和B1and-AItman

一致性分析。结果表明，GFC∕1C-MS/MS与ED∕1C-MS∕MS法对血清中FT3、

FT4的测定结果无统计学差异(P0∙05).所建立的方法快速、简便，受干扰因素

相对较少，便于临床推广，可为临床实验室游离甲状腺激素的快速、高效、准确

检测提供参考方法，同时为其它游离激素的检测提供了一种新的思路。

三碘甲腺原氨酸(Triiodothyronine,T3)和甲状腺素(Thyroxine,

，

T4)是两种主要的甲状腺激素其分泌量的增多或减少均可导致甲状腺功能障碍，

并可增加心血管疾病、糖尿病并发症和妊娠并发症的发生风险。正常情况下，

T3、T4分别约99.7%和99.97%与特异的血浆蛋白相结合，仅有0.3%和0.03%

为游离状态，简称为FT3和FT4而游离激素假说认为，甲状腺激素的游离形

o

式才是其活性部分，与生物效应密切相关。FT3和FT4的测定不受血清结合蛋

白的影响，是甲状腺功能体外实验的灵敏指标，可作为甲亢、甲减、甲状腺肿、

重症感染发热等疾病的辅助诊断。

由于血清中FT3和FT4临床检测的重要性，50多年来研究者们相继开发了

测定FT3和FT4的不同方法。但由于游离甲状腺激素的浓度极低,FT3的血液

浓度为1.4~6.0pg/m1,FT4为8.0~20.0pg∕m1并且结合态与游离态之间的内源

o

性平衡易受到扰乱，使得其检测结果的重复性、稳定性较差。因此，临床上准确

检测游离甲状腺激素仍然十分困难，极具挑战性。目前，临床实验室通常通过

免疫分析方法或物理分离方法检测FT3或FT4通过免疫法间接测定的FT3、

o

FT4含量易因其动态平衡被破坏而有误。尤其是在妊娠期，由于其结合蛋白的

显著变化和嗜异性抗体的存在，使得免疫测定结果不准确。美国甲状腺协会建

(

议，在妊娠期测定FT4的最佳检测方法为液相色谱-串联质谱1C-MS/MS)法。

该法分析灵敏度高、特异性好，已成为国外检测人血清中FT3FT4的金标准方

s

法。在结合态与游离态之间的内源性平衡受干扰最小的情况下，从血清中分离

出FT3和FT4是该方法前处理环节的关键