超灵敏检测核酸修饰的荧光生物传感器研究.pdf

目录

摘要I

AbstractIII

第一章绪论1

1.1核酸修饰1

1.1.1核酸修饰的分类1

1.1.2核酸修饰的生物学意义2

1.25-羟甲基尿嘧啶4

1.2.15-羟甲基尿嘧啶的概述4

1.2.25-羟甲基尿嘧啶的生理学功能5

1.2.35-羟甲基尿嘧啶的相关检测5

1.3肌苷10

1.3.1肌苷的概述10

1.3.2肌苷的生理学功能10

1.3.3肌苷的相关检测11

1.4荧光生物传感器在检测核酸修饰中的应用17

1.4.1单分子荧光检测方法18

1.4.2稳态荧光检测方法20

1.5本论文的研究内容22

第二章生物正交反应介导的酶促延伸驱动的树突状纳米组装用于乳腺组织中5-羟甲基尿

嘧啶的全基因组分析24

2.1引言24

2.2实验部分25

2.2.1实验仪器、试剂及寡核苷酸序列25

2.2.2实验步骤27

2.2.3单分子检测28

凝胶电泳检测28

2.2.5荧光成像28

2.2.6细胞培养28

2.2.7从细胞和组织中制备基因组DNA28

2.3结果与讨论29

2.3.15hmU测定原理29

2.3.2可行性验证31

2.3.3优化实验条件35

2.3.4灵敏度检测37

2.3.5特异性分析37

2.3.6重现性实验38

2.3.7回收率检测39

2.3.8实际样品分析39

2.3.9临床样本分析41

2.4小结42

第三章基于丙烯腈介导的DNA延伸阻滞和和引物生成介导的滚环扩增用于检测RNA中

肌苷修饰44

3.1引言44

3.2实验部分45

3.2.1实验仪器、试剂及寡核苷酸序列45

3.2.2实验步骤47

3.2.3荧光光谱测量48

3.2.4凝胶电泳检测48

3.2.5电化学分析48

3.2.6细胞培养48

3.2.7从细胞和组织中提取RNA48

3.3结果与讨论49

3.3.1肌苷检测原理49

可行性验证50

3.3.3优化实验条件53

3.3.4灵敏度检测54

3.3.5特异性分析55

3.3.6重现性实验56

3.3.7回收率检测56

3.3.8实际样品分析57

3.3.9临床样本分析58

3.4小结59

第四章总结60

参考文献62

攻读学位期间发表的学术论文以及获奖情况77

致谢78

摘要

核酸修饰在基因表达调控中起着重要作用。其中，DNA修饰在发育、衰老和癌症等多

种生物过程和疾病中扮演关键角色。