矾根组培苗工厂化培养技术规程.docxVIP

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引言

矾根组培苗工厂化培养技术规程

1范围

本标准规定了矾根（HeucheramicranthaDouglasexLindl.）组织培养育苗过程中材料的选择、消毒

灭菌、初代培养、继代培养、生根培养、组培苗的移栽和技术档案的建立等。

本标准适用于矾根在省内的工厂化组织培养育苗生产作业。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

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3定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1矾根（HeucheramicranthaDouglasexLindl.）

虎耳草科、矾根属多年生耐寒草本花卉。

3.2外植体

根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官（如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体，称为外植体。

3.3组培苗

在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下，诱导出愈伤组织，不定芽、不定根，最后发育成完整的植株，称为组培苗。

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3.4初代培养

又称诱导培养，外植体无菌接种后，置于培养室的弱光条件下进行培养，首次获得无菌材料，然后逐渐促进材料的分化和生长，这是试管苗的第一代，称初代培养。

3.5继代培养

又称分化培养，初代培养以后通过不断调试培养基和转接试管苗，使试管苗数量很快扩大，这种不断转苗增殖的过程称为继代培养。

3.6生根培养

在培养基上，利用从茎表皮细胞分裂形成凸起的根原基，进一步从表皮培养形成根的过程。

4组培室的构成及基础设备

4.1洗瓶室

用于玻璃器皿和实验用具的洗涤、干燥和贮存；培养材料的预处理与清洗；组培苗的出瓶、清洗和整理等。要求房间宽敞明亮，方便多人同时工作，有电源、水源，上下水通畅；地面耐湿、防滑、排水良好，便于清洁。

设备及用具：工作台、烘箱、晾干架、周转筐、各种规格的毛刷、药品柜等。

4.2培养基配置室

用于培养基的配置、植物材料的预处理。要求房间宽敞明亮、通风干燥，方便多人同时工作，有电源、水源，上下水通畅。

设备及用具：电子分析天平、托盘水平、电子天平、磁力搅拌器、蒸馏水器、酸度计、恒温水浴振荡器、微波炉、冰箱、展示柜、移液管、培养瓶、试剂瓶、烧杯、量筒、容量瓶、培养皿、玻璃棒、记号笔、封口膜、瓶盖、周装筐、纱布、小推车等。

4.3灭菌室

用于培养基、器皿、工具和其他物品的消毒灭菌。要求安全、通风、明亮，墙面和地面防潮、耐高温。水源、电源加热；上下水通畅。

设备及用具：压力灭菌锅、周转筐、换气扇、小推车等。

4.4接种室

进行植物材料的接种、培养物的转移等无菌操作，即无菌操作室。要求空间宜小不宜大，密闭、干爽安静、清洁明亮、不易积尘。门窗封闭性好、吊装紫外光灯，保持环境无菌或低密度有菌状态；安置空调机；人流与物流分开。

设备及用具：超净工作台、空调机、接种器械灭菌器、紫外光灯、酒精灯、广口瓶、三角瓶、接种工具、手持喷雾器、工作台、污物桶等。

4.5培养室

用于培养离体材料。要求面积不宜过大，10-20m2，培养室外有缓冲间或走廊；能够控制光照和温度；保持整洁，防止微生物污染；可通风、降湿、散热；专线供电和配电设备。

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设备及用具：空调、排风扇、培养箱、除湿机、时控器、干湿温度计、培养架、日光灯、工作台、配电箱等。

5材料的选择

5.1选择的部位

应选择矾根的茎尖。

5.2取材季节的选择

在春季芽开始萌发或正萌发生长时取材。

5.3器官发育年龄的选择

以当年嫩芽做材料，分生能力强，形态建成快。

5.4取材的大小

茎尖长0.5cm-1.0cm，

6消毒灭菌

6.1外植体消毒灭菌

用流水冲洗2h以上，拿到超净工作台上，用75%酒精处理30s-40s，无菌水冲洗3次，再用0.1%的升汞处理3min-4min，无菌水冲洗5次。

6.2培养基高压灭菌

用高压灭菌锅在压力1.1MPa，温度为121