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输血科RhD血型鉴定标准操作程序

RhD血型鉴定标准操作程序

RhD血型系统通过输血或妊娠可产生免疫性抗体，当遇到相应抗

原，可致溶血反应或新生儿溶血病。若误诊误治，可导致患者残废或

死亡。临床输血时，一般需作助血型鉴定。

一、RhD血型鉴定标准操作程序

【原理】

应用血凝试验检测红细胞抗原。RhD血型是由红细胞表面是存在

或缺失D抗原确定。D抗原于细胞株BS226细胞产生的单克隆抗体发

生特异性反应。

【试剂】

RhD（IgM）血型定型试剂盒（单克隆抗体）

【操作】

1．盐水法取小试管(10mm×60mm)1支，蜡笔标记，加试剂1

滴，再加人5%受检者红细胞1滴，混匀，1000r/min离心1min观察

结果。

2．对照管用蜡笔标记阳性和阴性，分别加人抗D血清（IgM）

1滴，阳性对照管加Rh阳性红细胞1滴，阴性对照管加Rh阴性红细

胞1滴，混匀，1000r/min离心1min观察结果。3．结果判定如

阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管凝集，即表示受检者红

细胞上有相应抗原；受检管不凝集，即表示受检红细胞上没有相应抗

原。

【附注】

1．单克隆IgMRh抗血清有商品试剂供应，可用盐水介质做凝集

试验。抗血清（IgM）1滴，加5%受检者红细胞悬液1滴，混合，置

7℃水浴1h，观察凝集反应。

2．如临床上只要求检查是否为Rh(D)阳性还是阴性，只需用抗D

血清进行鉴别。如结果为阴性，则应进一步检查排除弱D。

3.在我国汉族人群中，Rh阳性占99.66%，Rh阴性占0.34%。

4.阳性对照可取3人0型红细胞混合配成。阴性对照不易得到，

一般设计方法为正常AB型血清1滴，加5%D阳性红细胞悬液1滴和

菠萝酶试剂混匀，与受检管一同置7℃水浴1h。

5．Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体凝集

反应时，凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用

力振摇。

【假阳性反应原因分析】

1．试剂中存在具有其他特异性的抗体(指不完全D抗体)，因此，

对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份试验，因为

使用两份特异性相同的抗血清得到不一致的结果时，就会使检查人员

意识到有进一步试验的必要。

2．多凝集红细胞与任何人血清都会发生凝集。

3．当用未经洗涤的细胞做试验时，试样中的自身凝集和异常蛋

白质可能引起假阳性结果。

4．试剂瓶可能被细菌、外来物质或其他抗血清所污染。

【假阴性反应原因分析】

1．搞错抗血清，每次试验时应细心核对抗血清瓶子上的标签。

2．试管中漏加抗血清，在加人细胞悬液之前，必须检查试管中

有无抗血清。

3．未遵照抗血清使用说明书做试验，如抗血清和细胞间的比例

以及温育的温度和时间不正确。

4．抗血清保存不妥，试剂中的免疫球蛋白变质。

二、弱D（weaKD）型鉴定标准操作程序

【原理】

根据美AABB技术手册第12版(1996)规定：D“这术语不再使用，

携带弱的D抗原的红细胞仍被归类为D阳性，称之“弱D（weaKD）”。

原称之“D”红细胞一部分具有与正常D

阳性红细胞同样性质的D抗原，只是D抗原数量减少；另一部分原“D”

红细胞D抗原与正常D抗原相比缺少正常D抗原中1个或多个抗原表

位。

弱D型红细胞与某批或几批抗D血清在盐水介质及酶试验中不发

生凝集，但在间接抗人球蛋白试验中均发生凝集。因此，当用酶试验

检查发现与抗D不凝集时，不应轻率地定为Rh阴性，需进一步排除

弱D型的可能。

【试剂】

1．抗D血清不同生产单位或批号不同的抗D血清3～5个。

2．抗人球蛋白血清。

3．1%菠萝酶溶液。

4．5%受检红细胞悬液。

【操作】

1．将受检者红细胞分别与各批抗D血清作间接抗人球蛋白试验

(方法见本章第四节)。

2．将受检者红细胞分别与各批抗D血清作酶试验(方法见本章第

五节)。