增强抗生素对兽医临床常见病原菌敏感性的药物筛选及联合用药评价试验操作规范.docxVIP

增强抗生素对兽医临床常见病原菌敏感性的药物筛选及联

合用药评价试验操作规范

1范围

本文件规定了筛选增强抗生素对兽医临床常见病原菌敏感性的药物操作方法，操作流程及记录要求，并对筛选出的敏感药物与抗生素的联合作用进行评价。

本文件适用于中药单体、中药提取物、天然药物活性成分、抗生素等作为增强抗生素对常见病原菌敏感性的药物筛选。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂

WS/T639—2018抗菌药物敏感性试验的技术要求

EUCAST欧盟药敏试验标准（2017年版）

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

抗微生物药物敏感性试验Antimicrobialsusceptibilitytesting

检测微生物（本文件特指细菌）对抗微生物药物（本文件特指抗菌药物）的体外敏感性，以指导临床合理选用药物的微生物学试验，简称药敏试验。

3.2

最低抑菌浓度Minimalinhibitoryconcentration；MIC

在琼脂或肉汤稀释法药物敏感性检测试验中能抑制肉眼可见的微生物生长的最低抗菌药物浓度。

3.3

分级抑菌浓度Thefractionalinhibitoryconcentration；FIC

分级抑菌浓度指数FIC值在各类联合用药敏感菌试验的结果中可以作为评价和疗效判断依据基础的数值。

3.4

折点Breakpoint

能预测临床治疗效果，用以判断敏感、中介、剂量依赖型敏感、耐药、非敏感的最低抑菌浓度（MIC）数值。

3.5

敏感Susceptible

当抗菌药物对分离株的MIC值处于敏感范围时，使用推荐剂量进行治疗，该药在感染部位通常达到的浓度可抑制被测菌的生长，临床治疗可能有效。

4结果解释分类

实验室测试和报告抗菌药物的MIC值的结果，按折点分为:敏感（S）、剂量依赖型敏感（SDD）、中介（I）、耐药（R）或非敏感（NS）；实验室测试和报告抗菌药物联合抗生素增效敏感的FIC值的结果，按数值FIC≤0.5、0.5＜FIC≤1、1＜FIC≤2、2＜FIC时，其与抗生素的联合作用分别为协同作用、相加作用、无关作用或拮抗作用；从而判定筛选的药物为具有协同作用药物、具有相加作用药物、具有无关作用、具有拮抗作用药物。

5筛选试验方法

5.1设备和材料

下列设备和试剂适用于本文件。

5.1.1双人单面垂直净化工作台(SW-CJ-2FD)

5.1.2生化培养箱(LRH-250F)：36℃~38℃

5.1.3多功能酶标仪(M1000Pro)

5.1.4恒温振荡培养器(HZQ-X300C)

5.1.5自动立式高压灭菌器(GI80DS)

5.1.6十万分之一电子天平(BT125D)

5.1.70.22μm过滤器

5.1.8可调移液器：10μL~100μL，100μL~1000μL。

5.1.996孔细菌培养板

5.2菌种和培养基

5.2.1菌种

5.2.1.1大肠杆菌EscherichiacoliATCC25922。

5.2.1.2金黄色葡萄球菌StaphylococcusAureusATCC29213。

5.2.1.2沙门氏菌SalmonellaATCC14028

5.2.2培养基

保存、传代、增菌用LB固体和液体培养基，药敏筛选用MH固体或液体培养基[1]。

5.2.2.1保存及传代用细菌培养基；按照附录A.1配置。

5.2.2.2增菌用液体培养基；按照附录A.2配置。

5.2.2.3增菌用固体培养基；按照附录A.3配置。

5.2.2.4检定用培养基；按照附录A.3配置。

5.3试剂制备和保存

本方法所用化学试剂为分析纯，试验用水为蒸馏水或去离子水，试验用水应符合GB/T6682的规定。

5.3.1试样制备

协同增效剂候选药物储备液制备：将粉末状抗菌药物溶于无菌水或适当的溶剂中后过滤除菌，使其贮存浓度为5120μg/mL。贮存液最低制备浓度为1280μg/mL，最大试验浓度为32μg/L。

5.3.2试样保存

协同增效剂候选药物储备液于-80℃保存。

5.3.3测定方法

5.3.3.1方