实时荧光定量PCR法检测人骨肉瘤耐MTX细胞系中RFC、DHFR、GSTπ的mRNA表达.pdfVIP

实时荧光定量PCR法检测人骨肉瘤耐MTX细

胞系中RFC、DHFR、GST-π的mRNA表达

【摘要】［目的］研究RFC(还原叶酸载体)、GST-π（谷胱甘

肽S转移酶π）、DHFR（二氢叶酸还原酶）mRNA在人骨肉瘤U2-OS

细胞系及人骨肉瘤耐药细胞系U2-OS/R1-R3中的表达差异，并探讨其

在人骨肉瘤MTX化疗耐药中的意义。［方法］采用冲击并逐步增加诱

导药物浓度诱导的方法，诱导人骨肉瘤细胞系U2-OS，并建立耐MTX

细胞系（U2-OS/R1-R3），利用荧光定量PCR技术在mRNA水平检测RFC、

GST-π、DHFR在U2-OS及（U2-OS/R1-R3）中的表达。［结果］本试

验成功建立三株人骨肉瘤耐药细胞系U2-OS/R1-R3中，荧光定量PCR

结果显示MTX耐药与DHFRmRNA表达增加有关，与RFCmRNA的表达降

低有关，与GST-πmRNA的表达增加有关。［结论］本试验在基因水

平探讨人骨肉瘤细胞MTX化疗耐药机制，DHFR、GST-π基因表达的

增加及RFC基因表达的降低参与了人骨肉瘤细胞的MTX耐药，为临床

探索骨肉瘤患者的MTX耐药机制提供了重要的依据，为临床筛选MTX

化疗不敏感患者提供重要的依据。

【关键词】实时荧光定量PCR；甲氨喋呤（MTX）还原叶酸载

体（RFC）；二氢叶酸还原酶（DHFR）；谷胱甘肽S转移酶（GST-π）

Abstract:［Objective］Tostudythedifferencein

expressionofRFC,GST-π,DHFRmRNAbetweenhumanosteosarcoma

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U2-OScelllineandtheMTX-resisitantvariantsU2-OS/R1-R3,

andtoinvestigatethesignificanceinMTXresistanceforhuman

osteosarcoma.［Methods］ThreeresistantMTXhumanosteosarcoma

celllineswereestablishedbypulseexposureparentalcell

line(U2-OS)ingraduallyincreaseddoseofMTX.Theexpression

ofRFC，GST-

2/17

π，DHFRmRNAwereassayedbyreal-timefluorescence

quantitativepolymerasechainreaction(FQ-PCR).［Results］

ThreeMTX-resistantvariants(U2-OS/R1-R3)weresuccessfully

established,theresultsoftheFQ-PCRrevealedthattheMTX

resistancewasassociatedwiththedecreasedexpressionofthe

RFCmRNAandincreasedexpressionofDHFRmRNAandGST-πmRNA.

［Conclusion］TheauthorinvestigatedtheMTXresistant

mechanismofhumanosteosarcomacelllineatagenelevel.The

decreasedexpressionofRFCmRNAandtheincreasedexpression

ofDHFRmRNAandGST-πmRNAparticipateintheMTXresistance

inhum