卫生化学实验一 可见分光光度计主要性能检定.docx

实验一可见分光光度计主要性能检定

【目的与要求】

掌握可见分光光度计主要性能的检定方法和仪器的使用。

熟悉可见分光光度计的主要性能和技术指标。

了解可见分光光度计的基本结构。

【方法原理】

可见分光光度计是根据物质的分子对可见光谱区的电磁辐射的吸收光谱特征和吸收程度进行定性和定量分析的仪器，其测量原理是朗伯-比尔定律：

A=

式中：A为物质的吸光度；I0为入射单色光的强度；It为透射单色光的强度；T为物质的透光度；ε为物质的吸光系数，L/（cm·mol）；b为溶液层的厚度，cm；c为溶液中物质的浓度，mol/L。

为了确保分析的灵敏度和准确度，要对仪器进行定期检定，检定周期一般为1年。根据可见分光光度计检定规程（JJG178-1996）的规定，对光栅型和棱镜型仪器，检定的主要项目和技术指标如表2-1所示。

表2-1可见分光光度计检定项目和技术指标

检定项目

技术指标

棱镜型

光栅型

波长准确度（nm）

360~500

≤±3.0

≤±3.0

500~600

≤±5.0

600~700

≤±6.0

700~800

≤±8.0

800~1000

≤±10.0

波长重复性（nm）

≤相应波长准确度绝对值的一半

线性误差（%）

≤±6（吸光度为0.1~0.3）

≤±3（吸光度为0.3~0.6）

≤±4（吸光度为0.6~0.8）

【仪器与试剂】

仪器与器皿可见分光光度计，附相同光径的吸收池一套；镨钕玻璃滤光片。

试剂浓度分别为0.0300×103mg/L、0.0900×103mg/L、0.150×103mg/L的K2Cr2O7溶液；浓度分别为2.00×103mg/L、6.00×103mg/L、10.00×103mg/L的CoCl2溶液；浓度分别为2.00×103mg/L、6.00×103mg/L、10.00×103mg/L的CuSO4溶液。

【操作步骤】

波长准确度与波长重复性检定镨钕玻璃滤光片吸收峰的参考波长值见表2-2。

表2-2镨钕玻璃滤光片吸收峰的参考波长值

光谱带宽

参考波长值（nm）

2

431.3

513.7

529.8

572.9

585.8

739.4

807.7

5

431.8

513.7

530.1

574.2

585.7

740.0

807.4

8

432.1

513.9

529.6

574.9

585.8

740.4

807.0

将镨钕玻璃滤光片置于样品室内的适当位置，选择2个吸收峰参考波长，逐一做连续3次测量（从一个波长方向），记录吸收峰波长测量值。波长准确度和波长重复性的计算公式分别为：

?

δ

式中，?λ为波长的准确度，nm；δλ为波长重复性，nm；λi为波长测量值，nm；λ

线性误差检定标准溶液的浓度及测定波长如表2-3所示。

表2-3标准溶液的浓度及测定波长

溶液名称

溶液浓度（×103mg/L）

测定波长（nm）

备注

K2Cr2O7

0.0300

0.0900

0.150

440

浓度以铬计量

CoCl2

2.00

6.00

10.00

510

浓度以钴计量

CuSO4

2.00

6.00

10.00

690

浓度以铜计量

以蒸馏水为参比，用1cm吸收池，分别测定以上溶液的吸光度，每一浓度溶液必须重复测定3次，取其平均值。将记录的吸光度与对应的浓度，按下列公式计算各点的线性误差：

K=

A1

A1的线性误差

A

A

式中，c1、c2、c3是同一种溶液的3种不同浓度；A1

【实验结果】

表A波长准确度和波长重复性的检定结果

波长(nm)

吸光度

波长(nm)

吸光度

波长(nm)

吸光度

A1

A2

A3

A1

A2

A3

A1

A2

A3

500

0.136

0.136

0.136

515

0.326

0.326

0.326

531

0.524

0.524

0.524

505

0.177

0.179

0.179

520

0.283

0.283

0.283

532

0.509

0.509

0.509

510

0.280

0.280

0.281

525

0.456

0.457

0.457

535

0.390

0.391

0.391

512

0.333

0.333

0.333

528

0.508

0.508

0.508

540

0.178

0.178

0.178

513

0.343

0.343

0.343

529

0.522

0.522

0.522

545

0.105

0.104

0.105

514

0.339

0.339

0.339

530

0.528

0.528

0.528

550

0.089

0.089

0.089

表B线性误差检定结果

溶液名称

溶液浓度(×103mg/L)

吸光度

测定波长(nm)

第一次

第二次

第三次

平均值

K2Cr2O7

0.0300

0