《卫生化学》第一章色谱法引论.pptx

第一部分色谱法

第一章色谱法引论;第一节概述;第一节概述;第一节概述;第一节概述;第一节概述;层析法

一．??????色谱的起源，发展，分类

1931年,Kuhn卵黄(叶黄素)黄体素+玉米黄质素

1941年,Martin,分配柱层析

1944年,Martin,纸层析

1952年,James,气相色谱法

1956年,Stahl,薄层层析法

1967年,高压液相色谱法

Δ固定相

Δ流动相

Δ差速迁移

;色谱法的分类::

流动相:液体：液相色谱法

气体：气相色谱法

固定相:固体

液体

△按两相所处的状态分：

固定相

固体液体

流动相液体L-SCL-LC

气体G-SCG-LC

△按层析过程的机理分：

吸附层析：L-SC

分配层析：L-LC;△按操作形式分：

①柱层析

②纸层析

③薄层层析

二．色谱法的基本过程;三．??????色谱法的基本原理：差速迁移

§2液相柱层析法:吸附柱层析

分配柱层析

一.吸附柱层析

（一)?基本原理：

吸附力不同保留时间不同差速迁移分离

（二)分离过程

（三)吸附等温线

在一定的温度下，一个组分在吸附剂上的吸附规律，可以用在平衡状态时此组分在两相中的浓度关系曲线图来表示，这叫做吸附等温线。

;

图9-2三类等温线与相应的色谱峰

;（四）吸附柱层析的固定相——吸附剂

1.对吸附剂的要求（基本要求）

①应具有较大的吸附表面和一定的吸附能力（这种吸附应是可逆的，有利于组分的分离);

②与流动相和样品中各组分不发生化学反应（包括不相溶）;

③吸附剂的颗粒应有一定的粒度且均匀,常用目数表示，目数越大，颗粒越小。

2.吸附剂的种类和选择性

极性吸附剂:

酸性吸附剂：硅酸（分离酸性物质）

碱性吸附剂：氧化铝（分离碱性物质）

;非极性吸附剂：活性炭

（分离高分子化合物）

3.常用的吸???剂及其活性

硅胶酸性

氧化铝中性见吸附剂表

碱性

活性炭

液-固色谱中可用的固定相（按活性增加次序）:

1蔗糖5滑石9磷酸钙13硅酸镁

2淀粉6碳酸钠10碳酸镁14氧化铝

3旋复花粉7碳酸钾11氧化镁15活性炭

4柠檬酸镁8碳酸钙12硅胶16漂白土

;4.吸附剂的线性容量：

①吸附剂的比表面积;

②吸附剂的活性:活性越强,线性容量越小,故常用去活性来增大线形容量。（加水）

（五）吸附柱层析的流动相——洗脱剂

1.对流动相(洗脱相)的基本要求:

①纯度合格;

②与样品、吸附剂不发生化学反应;

③能溶解样品组分,且粘度小易流动,不致洗脱太慢

④保持柱效的稳定性(即不能有损柱效,也不能改变柱的保留特性)；

⑤对样品的回收率没有干扰,即溶剂易蒸发除去。

;2.洗脱剂的选择：依相似者相容的原理

常用的流动相的极性递增次序:

石油醚环己烷CCL4苯甲苯氯仿醋酸乙醚正丁烷丙酮乙醇水

二.分配柱层析.

对固定液的要求:

①选择性高

②化学稳定性好

③蒸气压低,热稳定性好

④粘度低

⑤溶解度好;(一)??分配色谱的基本原理及分离过程

被分离组分在两相间的K=Cs/Cm不同来分离

(二)??分配色谱的固定相和流动相,两相的选择:

①两相极性应相差