3.2基因工程的基本操作程序课件-高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.pptx

3.2基因工程的基本操作程序本节聚焦:1.基因工程的基本操作程序主要包括哪几个步骤？2.基因工程操作的每一步涉及的技术和方法有哪些？

苏云金杆菌(Bt基因）与载体拼接普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞抗虫棉获取导入抗虫基因（Bt抗虫蛋白基因）重组DNA分子培育转基因抗虫棉的简要过程1.目的基因的筛选与获取2.基因表达载体的构建3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定实例：具体的步骤是？(含抗虫基因）（含有并表达抗虫基因）

一目的基因的筛选和获取1.目的基因在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因，就是目的基因。根据不同的需要，目的基因不同，主要是指编码蛋白质的基因。如：与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。资料：苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴胞晶体蛋白（Bt抗虫蛋白），破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。科学家将“杀虫基因”转入棉花中，棉花产生Bt抗虫蛋白抵抗虫害。目的基因也可以是具有调控作用的因子。什么是基因？基因如何影响性状？

基因：非编码区非编码区启动子：RNA聚合酶的识别和结合位点开始转录编码区（1）原核生物基因终止子：终止转录一目的基因的筛选和获取

非编码区非编码区编码区与RNA聚合酶结合位点外显子内含子12345加工mRNA前体成熟mRNA不能编码蛋白质的序列=内含子+非编码区序列编码序列=外显子12345启动子终止子（2）真核生物基因转录目的基因的筛选和获取一

一目的基因的筛选和获取2.目的基因筛选方法：从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选随着测序技术的发展，以及序列数据库、序列比对工具等的应用，越来越多的基因的为人们所知。结构和功能DNA测序仪核苷酸序列比对氨基酸序列比对

一目的基因的筛选和获取3.目的基因的获取?获取目的基因的方法：①从生物组织中直接获取②从基因文库中获取③人工合成④利用PCR获取和扩增目的基因前提：方法：DNA合成仪基因比较小、核苷酸序列已知通过DNA合成仪用化学方法直接合成基因组文库（某生物全部基因）部分基因文库（主要是cDNA文库）

PCR——聚合酶链式反应PCR是一项根据的原理，在提供参与DNA复制的与，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。DNA半保留复制体外各种组分反应条件聚合酶链式反应DNA半保留复制体外（PCR扩增仪/PCR仪）对目的基因的核苷酸序列进行大量复制可以在短时间内大量扩增目的基因全称原理操作环境目的优点PCR技术一目的基因的筛选和获取PCR扩增仪控制温度利用PCR，既可用来扩增已得到的基因或DNA片段，也可以用来扩增很长的DNA分子中的目的基因从而得到该基因。(4)PCR技术获取和扩增目的基因

解旋酶DNA聚合酶▲子链的延伸方向：模板：原料：能量：酶：DNA的两条母链4种游离的脱氧核苷酸解旋酶、DNA聚合酶复制特点:①边解旋边复制②半保留复制碱基互补配对原则（保证复制的准确进行）要点回顾:体内DNA复制条件5端→3端复制原则:因为DNA聚合酶只能从5端向3端延伸子链。

3.PCR所需的基本条件:参与的组分在DNA复制中的作用解旋酶DNA母链合成DNA子链的原料催化合成DNA子链引物维持反应体系pH稳定提供DNA复制的模板断开氢键，打开DNA双链使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸（体外用耐高温的DNA聚合酶，如Taq酶）（体外用高温代替）4种脱氧核苷酸DNA聚合酶缓冲溶液01一目的基因的筛选和获取

PCR技术耐高温的DNA聚合酶DNA模板引物缓冲溶液四种脱氧核苷酸PCR扩增仪（PCR仪）条件:微量离心管——控制温度（dNTP）（2种）PCR的条件：目的基因DNA（模板）、四种游离的脱氧核苷酸、耐高温DNA聚合酶、引物、一定的缓冲溶液(维持反应体系的pH）、Mg2+（激活DNA聚合酶的活性）、控制温度变化

3.利用PCR获取和扩增目的基因过程：思考：复性的过程一定是引物与DNA模板链结合吗？复性时引物与DNA模板的结合是随机的，也存在解开的两条DNA单链的结合，但两条模板链重新结合的概率较低。原因是：①模板链一般比较长，比引物复杂得多，重新结合的概率较低。②加入引物的量足够多，而模板链数量少，引物与模板之间的碰撞结合机会，远远高于模板互补链之间的碰撞机会。目的基因的筛选和获取一

PCR技术扩增结果：以指数形式扩增，即____（n为扩增循环的次数）2n（1）若开始只