第12章核酸与核苷类药物ppt课件.pptxVIP

第一节、概述

第二节、核酸类药物的生产

;第一节概述;核酸是一种多聚体大分子，它的组成单元是核苷酸，将核苷酸中的磷酸基团去掉，剩余部分称核苷，核苷进一步分解可生成戊糖和碱基。;嘌呤核苷酸;核酸类药物分类

——具有天然结构的核酸类物质;核酸类药物分类

——自然结构核酸类物质的类似物和聚合物;;2、酶解法制备戊糖核苷酸

我国从60年代开始使用核酸酶P1降解核糖核酸生产单核苷酸，日本年产呈味核苷酸（肌苷酸和鸟苷酸）3000吨，其中60%是使用酶解法生产的。;3．菌体自溶法生产核苷酸

磷酸二酯酶在合适的条件下降解细胞内的RNA可产生5’-核苷酸。在国内用谷氨酸产生菌体自溶法生产5’-核苷酸。

菌体自溶法生产核苷酸工艺流程：;4．碱水解法生产2’,3’-混合核苷酸

RNA结构中的磷酸二酯键对于碱性条件不稳定,很容易生成2,3-环状磷酸酯,此环状磷酸酯对碱更不稳定,很易加水分解生成2,3-混合核苷酸。取RNA配成3％～3.5%的水溶液,加氢氧化钠达0.3mol/L浓度,升温至38℃,保温16～20小时,用6mol/L盐酸中和至pH7.0,从RNA水解成2,3-核苷酸的降解率达95％以上,将2,3-混合核苷酸制成每片含50～100mg的片剂,经临床使用,对非特异性血小板减少症、对白血球减少症、癌肿的化疗和放疗后的升白血球均有较好疗效。;（二）发酵法生产核苷酸

1．发酵法生产肌苷酸（IMP）

2、发酵生产黄苷酸（XMP）及酶法转化成鸟苷酸;;①SAMP合成酶③IMP脱氢酶

②SAMP裂解酶④GMP合成酶;（三）半合成法制备核苷酸(略)

由于发酵法生产核苷的产率很高，核苷悬浮于磷酸三甲酯或磷酸三乙酯中，在冷却条件下加入氯化氧磷，进行磷酸化，从核苷生成5’-核苷酸收率可达90%。

例一：肌苷2mmol/L悬浮于5ml磷酸三乙酯中，温度控制0℃，添加氯化氧磷6mmol/L，水2mmol/L，反应2h，5’-IMP摩尔产率达91％。

例二：鸟苷2mmol/L悬浮于5ml磷酸三甲酯中，温度控制0℃，添加氯化氧磷6mmol/L，水2mmo/L，反应6h，5’-GMP摩尔产率达90%。;第二节核酸类物质的生产

一、RNA的提取与制备;发酵法生产高含量RNA酵母及其RNA提取工艺流程见图;2.RNA提取实例;二、DNA的提取与制备;2．具有生物活性DNA的制备

可从动物内脏（肝、脾、胸腺）中提取制备，操作条件0～3℃。

动物内脏加4倍量生理盐水经组织捣碎机捣碎1分钟，匀浆于2500rpm离心30分钟，沉淀用同样体积的生理盐水洗涤3次，每次洗涤后离心，将沉淀悬浮于20倍量的冷生理盐水中，再捣碎3分钟，加入2倍量5％十二烷基磺酸钠，并搅拌2～3小时，在0℃2500rpm离心，在上层液中加入等体积的冷乙醇，离心即可得纤维状DNA，再用冷乙醇和丙酮洗涤，减压低温干燥得粗品DNA。;三、核苷类药物的制备;;生产菌株：

（1）酶6、7缺失（为腺嘌呤缺陷型）积累IMP---肌苷（肝炎辅助药）；

（2）酶4缺失（为鸟嘌呤缺陷型）积累XMP---黄苷；

（3）酶5缺失积累鸟苷。;肌苷生产菌（AJ11102）遗传性状：（菌种见P197）

①腺嘌呤缺陷型（A-）；

②GMP还原酶缺失（GMPred-）；

③磺胺脒抗性（SGr）；

④精氨酸缺陷型（Arg-）。

选育出从遗传上解除正常代谢控制的理想菌株。肌苷产率达20g/L.;;（二）聚肌胞苷酸（聚肌胞）(略)

1、结构与性质

1967年美国人Field发现聚肌胞是干扰素诱导物，而且具有广谱抗病毒作用。本品是人工合成的干扰素诱导剂，系由多聚肌苷酸和多聚胞苷酸组成的双股多聚核苷酸。本品可溶于0.85％氯化钠溶液。

2、生产工艺

70年代中期我国开始研制聚肌胞，其生产工艺如下：

1）底物5’-核苷二磷酸吡啶盐的制备（P199）

;;EDTA1；聚合酶5单位，pH9.0，37℃，3～4小时。用盐酸调pH1.5～2.0，使PolyI（或PolyC）沉淀，立即离心。此后在磷酸液冲液中溶解，等摩尔PolyI与PolyC混合，生成产品。

3、作用与用途

本品具有抗病毒，抗肿瘤，增强淋巴细胞免疫功能和抑制核酸代谢等作用。本品注入人体诱导产生干扰素。

临床已试用于肿瘤、血液病、病毒性肝炎及痘类毒性感染等多种疾患。