发酵工程制药实验链霉菌发酵方案.pdfVIP

发酵工程制药实验链霉菌发酵方案--第1页

试验2灰色链霉菌的活化

一、试验目的

学习制备高氏一号斜面培育基的方法以及斜面接种技术。

二、试验原理

高氏一号斜面培育基是一种合成培育基，用于培育放线菌。

三、试验试剂与仪器

1.菌种：灰色链霉菌；

2.培育基：可溶性淀粉20g，硝酸钾1g，氯化钠0.5g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.5g，

硫酸亚铁0.01g，琼脂20g，水1000毫升，PH7.2—7.4〔配制时留意，可溶性淀粉要先用冷

水调匀后再参加到以上培育基中〕；

3.器材：天平、500mL刻度量杯、小刀、牛角匙、玻棒、纱布、18mL×180mL试管、

棉花、电炉、烧杯、记号笔、酒精灯、接种环等。

四、试验步骤

1.高氏一号培育基的制备

〔1〕按配方称量药品，加热搅拌至琼脂完全熔化，补水至1000mL。趁热分装于

18mL×180mL试管，斜面以8mL为宜。

〔3〕分装完毕后，塞好棉塞并将试管捆扎好。高压蒸汽灭菌：121℃灭菌20min，灭菌

后趁热摆斜面。

2.斜面接种

接种是将纯种微生物，在无菌操作条件下，移植到已灭菌并适宜该菌生长生殖所需要的培育

基中。为了获得微生物的纯种培育，要求接种过程中必需严格进展无菌操作。一般是在无菌室内，

超净工作台或试验台酒精灯火焰旁进展。

（1）左手拿试管菌种，右手拿接种环，先将金属环烧灼灭菌，再将接种环在空白培育

基处冷却，挑取菌落，在火焰旁稍等片刻。

（2）左手将试管菌种放下，拿起斜面培育基。在火焰旁用右手小指和手掌边缘拔下棉

塞并夹紧，快速将接种环伸入空白斜面，在斜面培育基上轻轻划线，将菌体接种于其上。划线

时由底部向上划始终线，始终划到斜面的顶部。留意勿将培育基划破，不要使菌体沾污管壁。

（3）灼烧试管口，在火焰旁将棉塞塞上。接种完毕，接种环上的余菌必需灼烧灭菌后

才能放下。

（4）斜面置于28℃恒温箱中，培育5～6d观看结果。

发酵工程制药实验链霉菌发酵方案--第1页

发酵工程制药实验链霉菌发酵方案--第2页

试验3灰色链霉菌的摇瓶种子制备

一、试验目的

学习制备摇瓶种子培育基的方法以及种子扩大培育技术。

二、试验原理

种子扩大培育简称种子扩培，是发酵工程的一个组成局部，其指将保存在砂土管、冷冻枯

燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培育,

最终获得肯定数量和质量的纯种过程。其目的首先是出于接种量的需要与菌种的驯化，同时对

于缩短发酵时间、保证生产水平也有帮助。

种子扩培的一般过程是：

斜面菌种→一级种子培育〔摇瓶〕→二级种子培育(种子罐)→发酵

对于种子制备过程，其大致可区分为试验室阶段和生产车间阶段，前期不用种子罐，所用

的设备为培育箱、摇床等试验室常见设备，在工厂这些培育过程一般都在菌种室完成，因此将

这一培育过程称为试验室阶段的种子培育。而后期种子培育在种子罐里面进展，一般在工程上

归为发酵车间治理，因此形象地称这些培育过程为生产车间阶段。并非全部的种子扩大培育都

承受从摇瓶到种子罐的二级发酵模式，其实际发酵级数受到发酵规模、菌体生长特性、接种量

的影响。

摇瓶培育技术问世于本世纪30年月，由于其简便、有用，广泛用于微生物菌种筛选、

试验室大规模发酵试验、种子培育等。摇瓶培育设备主要有旋转式摇床和