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可食动物肌肉和肝脏中利巴韦林及其代谢物残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了动物可食性组织中利巴韦林残留量液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于可食动物肌肉、肝脏中利巴韦林及其代谢物1H-1,2,4-三氮唑-3-甲酰胺残留量的测定。

2规范性引用文件

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件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

试样中利巴韦林及其代谢物1H-1,2,4-三氮唑-3-甲酰胺采用1%乙酸-甲醇提取，经乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）和十八烷基硅烷（C18）分散净化，浓缩定容后，超高效液相色谱-电喷雾串联质谱测定，同

位素内标法定量。

4试剂及标准液制备

除非另有规定，以下试剂均为分析纯。水符合GB/T6682规定的一级水标准。

4.1试剂

4.1.1甲醇：色谱纯。

4.1.2甲酸：色谱纯。

4.1.3乙酸铵：色谱纯。

4.1.4乙酸：色谱纯。

4.2标准品

2

4.2.1利巴韦林，纯度大于98.0%。

4.2.21H-1,2,4-三氮唑-3-甲酰胺（TCONH2），纯度大于98.0%。

4.2.313C5-利巴韦林（13C5-Ribavirin），纯度大于99.0%。

4.3溶液配制

4.3.1100mg/L标准储备液：分别准确称取适量的利巴韦林和TCONH2标准物质，用甲醇配制成100

mg/L的标准储备液，于-20℃下避光储存，保存期1年。

4.3.21mg/L混合标准中间液：分别准确吸取1mL标准储备液（4.3.1）于100mL容量瓶中，用甲醇

稀释至刻度，摇匀得到1mg/L的混合标准中间液，于-20℃下避光储存，保存期6个月。

4.3.3100mg/L内标储备液：准确称取适量的13C5-利巴韦林标准物质，用甲醇配置成100mg/L的

内标准储备液，于-20℃下避光储存，保存期1年。

4.3.41mg/L内标中间液：用移液管吸取内标准储备液（4.3.3）1mL于100mL容量瓶中，用甲醇稀

释至刻度，摇匀得到1mg/L的内标中间液，于-20℃下避光储存，保存期6个月。

4.3.5混合基质标准工作溶液：根据每种标准的灵敏度和线性范围，移取适量的混合标准中间液

（4.3.2）和内标中间液（4.3.4），用空白基质稀释至合适浓度，使用前现用现配。

4.4材料

4.4.1乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）。

4.4.2十八烷基硅烷（C18）。

4.4.3微孔滤膜（水相）0.22μm。

5仪器和设备

5.1超高效液相色谱-电喷雾串联质谱（配电喷雾离子源）。

5.3组织均质器。

5.4电子分析天平。

5.5高速冷冻离心机：转速不低于5000r/min。

5.6氮气仪。

5.7绞肉机。

6试样制备与保存

6.1试样的制备

取动物肌肉、肝脏样品约500g用肉类组织捣碎机搅碎，装入洁净容器作为试样，密封，并标记注

明。

6.2试样的保存

将试样于-20℃保存。

3

7分析步骤

7.1提取

称取称取1g（精确至0.01g）样品于50mL聚乙烯管中，加入浓度为200μg/L的内标溶液50μL，加

入5mL1%乙酸-甲醇（1:99，V/V）溶液，涡旋1min，在4500rpm下离心5min，取上清液待净化。

7.2净化

称取50mgPSA和50mgC18吸附剂置于15mL离心管中，移取上清液（7.1）至此离心管中，涡旋30s，然后在4500r/min下离心5min，将上清液转移到另一离心管中，在45℃条件下氮气吹干，残渣用1mL初始流动相溶解，放置1min，然后涡旋30s，经0.22μm孔径滤膜过滤后，供液相色谱-串联质谱

仪测定。

7.3液相色谱条件

a）色谱柱：ZORBAXSB-Aq（100mm×3.0mm，1.8μm）。

b）流动相：流动相A为2mmol/L乙酸铵水溶液（含0.1％甲酸）；流动相B为甲醇。

c）流速：0.4mL/min。

d）柱温：35℃。

e）进样体积：5.0μL。

f）流动相和梯度洗脱条件见表1。

表1液相色谱梯度洗脱条件

时间（min）

流动相A（%）

流动相B（%）

0

100

0

2.5

100

0

3.5

2

98

6.0

2

98

7.0

100