药品的生物检定法.ppt

凝胶法的灵敏度低：0.5Eu/ml，规格：0.1ml定量法高，0.06Eu/ml，工艺在凝胶法基础上发展而来，0.6ml，也有1.2和3.1ml。检测方法区别：12内毒素小于0.03Eu/ml的无菌注射用水，鲎试剂反应的PH：6－8，而工业生产要求为PH：5－7，所以不能以企业生产的灭菌注射用水来作为检查用水，必须是中检所指定生产。药典规定凝胶法小于0.03Eu/ml，定量法小于0.005Eu/ml，买时要配套，与鲎试剂买一个厂家生产的。关于检查用水内毒素检查法鲎试剂02内毒素01检查用水03学习目标复习提问新课大纲新课内容本课小结课后习题学习目标复习提问新课大纲新课内容本课小结课后习题第五模块生物检测技术第九章药品的生物检定法知识目标理解热原检查法、细菌内毒素检查法的含义；掌握无菌检查法、微生物限度检查的主要方法；理解药物异常毒性检查的方法技能目标能检查药物制剂的热原、细菌内毒素；能进行药物的无菌检查；能测定药物的微生物限度；能检查药物的异常毒性学习目标复习提问2．双碟的制备方法？1．什么是管碟法？管碟法操作的主要流程？本节主要内容：热原检查:简述具体操作方法内毒素检查:简述具体操作步骤010203新课大纲一、概述1.生物检定法－－用整体动物的体内试验或离休器官、组织、细胞等的体外试验来测定药品生物活性，以反映其临床功能及效价的一种方法。常见药物的生物检定法肝素绒促性素缩宫素胰岛素洋地黄二、热原检查法什么是热原反应？含热原的注射液注入家兔体内，引起体温升高40度以上，甚至出现昏迷、休克、死亡的现象。3.热原的基本性质？水溶性、不挥发性、耐热性、滤过性溶剂带入原料带入容器用具带入制备过程污染灭菌不完全使用带入02污染途径01除去方法01吸附法、离子交换法、反渗透法、超滤、高温、酸碱02检查方法家兔致热实验法具体步骤静脉注入药物，观察家兔体温升高情况，超过限度认为有热原反应供试用家兔试验前的准备检查法结果判断3只兔：1小时测1次，共3次，最高-最低＝升高的温度结果：均升高在0.6度以下且升高的总数在1.4以下认为符合规定智能热原仪温度探头三、细菌内毒素检查法本法是利用鲎试剂来检测或量化由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素（单位以EU表示），以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法。系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。分为浊度法和显色基质法。①浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。可分为终点浊度法和动态浊度法。②显色基质法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少而测定内毒素含量的方法。可分为终点显色法和动态显色法。凝胶法光度测定法什么是鲎试剂？什么是细菌内毒素？凝胶法原理内毒素与鲎试剂起反应产生凝胶，观察到浑浊。①来源：G-细胞壁外膜上的脂多糖（LPS）成分，所以内毒素是化学成分不是简单的生命体，所以灭内毒素时应与其他成分区分。什么是细菌内毒素？化学结构：1abc2a(o－特异性多糖链)类似于抗原，亲水性3b核心多糖4c类脂A，疏水性，是生理活性中心，5实验证明，将a和b切下来组合后与c部分产生的效果相当，所以认为c是生理活性部位。6③特点：根据其特殊结构，疏水基团易粘合在容器的器壁，而在水中的浓度就变低，另一方面疏水端相连结后，亲水端再与别的疏水端相连而成大的集团，使其在水中的分布不均匀，所以药典规定在使用时要经过振荡及混旋15分钟，并立即做下一步操作，但这种现象只限于人工提纯品。与热原的关系：广义热原包括内毒素、生物酶、蛋白质、化学物质（后三种成分也有致热作用，但不引起器质性的病变），而狭义的热原就等于内毒素（引起器质性的病变）。所以药品检测时一般认为没有内毒素，合格时，热原检测也合格。分类：01分国家标准品：（简写RSE或NSE）效价：9000，单位Eu,由中检所生产，代号981就是指98年1月生产。02和工作标准品：（CSE和WSE）效价：100－200，也有50或70，单位Eu，到中检所购买，是法定试剂。03①拉丁文TAL（东方鲎）、LAL（美洲鲎），血液是蓝色（还有蝉）。被称为是活化石，大约生活在4亿年前至今，体态基本没有变化，品种有10多种，但能作为鲎试剂（血液变形细胞溶解物的