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基于种实表型性状和SSR标记的杉木2代种子园遗传多样性分析

一、1.材料与方法

(1)本研究选取了我国南方杉木主要种植区的30个杉木种子园作为研究对象，每个种子园随机选取100株树木，共计3000株。种子园的树木均属于杉木的优良品系，具有较高的遗传多样性。在种子采集过程中，严格按照种子园的管理规范进行，确保采集的种子质量。种实表型性状的测定包括树高、胸径、冠幅、枝下高、叶面积等指标，采用标准测量工具进行测量，并记录数据。

(2)为了分析杉木种子园的遗传多样性，本研究采用了SSR分子标记技术。首先，从杉木基因组中筛选出20对SSR引物，通过PCR扩增和电泳分析，对3000株杉木的DNA样本进行基因分型。实验过程中，严格控制PCR反应条件，确保扩增结果的准确性和重复性。随后，对扩增产物进行银染和拍照，根据SSR标记的基因型频率和等位基因数目，评估种子园的遗传多样性水平。

(3)遗传多样性分析采用PopGen、Structure等软件进行。在PopGen软件中，对每个SSR标记的基因型频率进行卡方检验，以评估基因型频率的偏离程度。同时，利用Structure软件对杉木种子园的遗传结构进行推断，通过贝叶斯推断方法，确定遗传结构的最优参数。此外，还计算了Neis基因多样性指数、Shannon-Wiener多样性指数和遗传距离等指标，全面评估杉木种子园的遗传多样性水平。

二、2.种实表型性状分析

(1)种实表型性状分析中，首先对杉木种子园的树木进行了详细的测量，包括树高、胸径、冠幅、枝下高和叶面积等指标。结果显示，树高在12.0-25.0米之间，平均值为18.5米；胸径在30.0-60.0厘米之间，平均值为45.2厘米；冠幅在10.0-15.0米之间，平均值为12.8米；枝下高在4.0-8.0米之间，平均值为6.2米；叶面积在2000-5000平方厘米之间，平均值为3500平方厘米。以某种子园为例，其树高、胸径、冠幅、枝下高和叶面积的标准差分别为2.5米、3.8厘米、1.2米、0.8米和500平方厘米。

(2)在分析杉木种子园的种实表型性状时，还考虑了性别比例、结实率和种子千粒重等指标。性别比例方面，雌雄比例在1:1至3:1之间，平均值为1.5:1。结实率在50%-90%之间，平均值为75%。种子千粒重在200-400克之间，平均值为280克。例如，在A种子园中，性别比例为1.2:1，结实率为80%，种子千粒重为250克。

(3)进一步分析种实表型性状与杉木生长环境的关系，发现树高、胸径和冠幅等指标与年均温度、年降水量和土壤肥力等环境因素存在显著的正相关关系。以年均温度为例，相关系数为0.87，表明年均温度越高，杉木的树高、胸径和冠幅等指标越大。此外，通过对不同年份杉木种子园的种实表型性状进行比较，发现生长环境变化对杉木的生长发育具有显著影响。例如，在连续两年干旱的情况下，某种子园的树高、胸径和冠幅等指标较干旱前降低了15%-20%。

三、3.SSR标记分析

(1)在SSR标记分析中，共筛选出20对引物，经过PCR扩增和电泳检测，成功获得20个多态性标记。这些标记覆盖了杉木基因组的不同区域，能够有效反映其遗传多样性。在3000个杉木样本中，每个标记平均检测到5.2个等位基因，其中多态性等位基因占总等位基因数的85.3%。通过计算Neis基因多样性指数，发现杉木种子园的基因多样性指数为0.68，表明遗传多样性较高。

(2)对SSR标记的基因型数据进行卡方检验，结果显示，除1个标记外，其余19个标记的基因型分布均符合哈迪-温伯格平衡。这意味着杉木种子园的遗传结构稳定，遗传漂变和选择压力对遗传多样性的影响较小。此外，通过分析等位基因频率，发现杉木种子园的等位基因频率分布呈现偏态，说明存在一定程度的基因流和基因分化。

(3)基于SSR标记的遗传多样性分析，构建了杉木种子园的遗传结构。通过主成分分析（PCA）和结构分析（Structure），将3000个杉木样本分为3个遗传群体。这3个群体在地理分布上具有一定的对应关系，表明地理隔离是影响杉木遗传结构的重要因素。此外，通过对遗传群体的遗传距离计算，发现群体间的遗传距离在0.2-0.4之间，说明群体间存在一定的遗传差异。

四、4.遗传多样性分析

(1)遗传多样性分析结果表明，杉木种子园的遗传多样性指数（H）为0.68，Shannon-Wiener指数（I）为1.20，显示出较高的遗传多样性水平。通过聚类分析，将杉木种子园划分为3个遗传亚群，亚群间的遗传距离为0.25-0.35。其中，亚群A位于种子园东部，亚群B位于中部，亚群C位于西部。

(2)在遗传多样性分析中，Neis基因多样性指数（NeisH）的平均值为0.63，表明杉木种子园内部基因型多样性较高。此