PTX3在骨关节炎发病中的作用机制.pdfVIP

摘要

背景：骨关节炎（osteoarthritis,OA）又叫退行性骨关节炎，是一种致残率最

高的常见老龄化骨科疾病。近年来随着我国步入人口老龄化，骨关节炎发病人数

急剧上升，造成严重的社会问题。骨关节炎的临床病症主要是软骨退化、甚至消

失增生骨赘，进而造成关节摩擦性疼痛感增强、关节僵硬，最终失去功能致残。

骨关节炎的成因和诱因很多，相关学者从生理生化角度证实主要是骨稳态失衡所

造成。近年来，许多研究指向淋巴管回流障碍是导致炎症发生的原因之一，关节

囊的淋巴管和血管已被证实参与了该过程。本文以小鼠淋巴内皮细胞、小鼠血管

内皮细胞为研究材料，运用一系列细胞、分子生物学和免疫学技术探讨PTX3蛋

白在骨关节炎发生发展中的可能作用机制。

目的：本课题旨在通过研究PTX3和骨关节炎发生的关联，阐明PTX3在骨

关节炎发病中的可能作用和机理。

mouselymphaticendothelial

方法：本研究在体外实验中向小鼠淋巴内皮细胞（

cells,mLEC）、小鼠脑微血管内皮细胞（brain-derivedEndothelialcells.3,bEnd.3）

中转入Ptx3过表达质粒、Ptx3siRNA后，利用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）

adenosinetriphosphate,ATPPtx3mLEC

和三磷酸腺苷（）刺激过表达与敲减的、

bEnd.3细胞建立细胞炎症模型。使用流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡的变

化；划痕实验检测细胞迁移能力的变化；微板法检测细胞模型经脂多糖、三磷酸

腺苷处理后培养液中乳酸脱氢酶（LDH）漏出率；使用蛋白免疫印迹、实时荧光

PCRPtx3RankLM-CSFmRNA

定量技术检测细胞模型、、在蛋白表达水平和表

达水平等方面的变化。体外实验中通过前交叉韧带横断法建立C57BL6小鼠骨关

节炎模型，向小鼠膝关节腔内注射Ptx3过表达细胞、Ptx3siRNA细胞检测小鼠

骨关节炎模型发生的病理变化；微计算机断层扫描技术（microcomputed

tomography,MicroCT）检测膝关节组织骨体积分数；制作石蜡切片进行苏木精-

伊红染色、番红固绿染色、甲苯胺蓝染色实验检测其形态、软骨细胞的病理变化；

采集小鼠静脉血分离血清通过酶联免疫吸附测定实验（enzymelinked

immunosorbentassay,ELISA）检测Ptx3蛋白水平的变化；采集小鼠静脉血分离血

RNAPCRPtx3RankLM-CSF

清提取总利用实时荧光定量技术检测血清中、、

I

在mRNA水平的变化。

200ng/mlLPS5mMATP

结果显示：体外实验中在、刺激下，与空白对照、

模型相比，Ptx3过表达小鼠淋巴内皮细胞和Ptx3过表达血管内皮细胞中Ptx3、

RankLM-CSF

、表达水平均明显上升，细胞增殖能力降低，细胞凋亡增加，细胞

迁移能力下降，LDH漏出率上升；Ptx3敲减小鼠淋巴内皮细胞和Ptx3敲减小鼠

Ptx3RankLM-CSF

血管内皮细胞表达、、表达水平下降，细胞增殖升高，细胞凋

亡降低，细胞迁移能力增加，LDH漏出率下降。体