ACSS3在肺纤维化中的作用及机制研究.pdf

摘要

特发性肺纤维化(Idiopathicpulmonaryfibrosis,IPF)是一种不明病因的进行性间质性

肺疾病，其在老年人群中发病率较高。尽管近年来对纤维化病理机制和治疗方法的研究

都取得了一定的进展，但目前其潜在病理机制仍不清晰。临床上批准的治疗肺纤维化的

药物只能起到缓解纤维化症状的作用，并不能治疗和预防肺纤维化。特发性肺纤维化的

发生伴随着Ⅱ型肺泡上皮细胞稳态失衡、线粒体功能障碍和代谢重编程。酰基辅酶A合

成酶短链家族成员3(Acyl-CoASynthetaseShortChainFamilyMember3,ACSS3)是线粒体

中代谢短链脂肪酸的关键酶，能利用短链脂肪酸合成酰基辅酶A，进而参与细胞的代谢

调控。目前在肝癌、前列腺癌、膀胱癌等肿瘤疾病中都发现ACSS3的异常表达，但其

在肺纤维化中的作用机制尚不清楚。

本文通过对纤维化患者和正常人的转录组数据集进行分析，发现ACSS3在肺纤维

化患者的肺组织中表达减少。接下来，构建肺纤维化小鼠模型，分离小鼠肺组织线粒体

以进行质谱分析，发现肺纤维化小鼠的肺组织线粒体中的ACSS3的蛋白表达减少。免

疫印迹分析、实时荧光定量PCR，免疫组织化学染色均证实了ACSS3在纤维化小鼠肺

组织中表达减少，且免疫组化的结果显示ACSS3主要分布在气道上皮和肺泡上皮中，

推测ACSS3能够调控肺纤维化的发生。用博莱霉素(BLM)处理A549细胞构建细胞损伤

模型，发现博莱霉素处理后，A549细胞中ACSS3的表达减少，表明ACSS3可能在肺

泡上皮细胞中发挥作用。

为了探究ACSS3对肺泡上皮细胞的影响，构建了ACSS3过表达质粒和ACSS3-sh稳

定表达的细胞系。在转染ACSS3质粒的基础上，对细胞周期、增殖、细胞活力及细胞

迁移能力进行检测，结果表明ACSS3抑制上皮细胞活力及细胞迁移能力。其次，评估

了ACSS3对上皮细胞代谢能力的影响，结果表明ACSS3抑制脂肪酸氧化（FAO）过程，

促进厌氧糖酵解过程。具体而言，ACSS3高表达导致脂酰肉碱转移酶（CPT1α）表达减

少，脂肪酸氧化过程被抑制，ATP含量减少，代谢中间产物乙酰CoA减少，细胞代谢

稳态失调。然后，通过线粒体荧光染色探究ACSS3对线粒体的影响，表明ACSS3通过

调控线粒体动态调节蛋白的表达，破坏线粒体形态，加剧线粒体功能障碍。此外，评估

了ACSS3对上皮细胞表型的影响，表明ACSS3促进上皮细胞获得间质细胞标志物，使

上皮细胞趋向于向间质细胞转化。进一步评估ACSS3对上皮细胞稳态的影响，在转染

ACSS3后对细胞的自噬能力及凋亡情况进行检测，表明ACSS3阻断细胞自噬过程，上

皮细胞不能维持自身稳态平衡，进而引发细胞凋亡。上述结果表明ACSS3通过参与细

胞代谢过程，促进上皮细胞稳态失调，最终导致细胞损伤和凋亡。

为进一步探究ACSS3对肺纤维化的影响，构建了Acss3过表达小鼠模型，并用博

莱霉素使小鼠发生肺纤维化。测定小鼠肺部羟脯氨酸含量，组织染色对肺组织病理学进

行分析，免疫印迹分析及实时荧光定量PCR检测胞外基质蛋白的表达，并对组织纤维

化程度进行综合分析。实验结果显示在博莱霉素的作用下，灌注AAV-Acss3的小鼠与

AAV组的小鼠相比，肺组织实质区域减少，表明Acss3可以改善博莱霉素诱导的实验性

肺纤维化。

综上所述，实验结果表明：（1）ACSS3在IPF患者及BLM诱导的模型小鼠的肺组

织中表达下调；（2）ACSS3破坏上皮细胞稳态：ACSS3通过调控CPT1A的表达抑制脂

肪酸氧化，从而引起细胞能量应激（ATP减少，糖酵解增加等），导致上皮细胞稳态失

调、线粒体功能障碍进而引起细胞活力下降、细胞周期调控阻滞及细胞凋亡增加；（3）

体内过表达Acss3能够改善BLM诱导的实验性肺纤维化。本研究证实了ACSS3在能量

代谢和线粒体稳态维持中的作用，也为肺纤维化的研究和治疗提供了新的思路。

关键词：特发性肺纤维化，Ⅱ型肺泡上皮细胞，ACSS3，代谢重编程，线粒