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摘要
特发性肺纤维化(IdiopathicPulmonaryFibrosis,IPF)是一种发病机制复杂的慢性、
进行性和死亡率极高的肺部疾病,其主要特征是过度沉积的基质导致肺泡结构的破坏和
功能的不可逆丧失。尽管近年来研究者们已经在其发病机制和临床治疗方面取得了一定
的进展,但这种毁灭性疾病目前仍然无法治愈,确诊后的中位生存期仅为3-5年,对人
类生命健康产生了极大威胁。
线粒体核糖体是一个55S复合体,由两个亚基组成,即39S大亚基和28S小亚基。
线粒体核糖体蛋白(mitochondrialribosomalproteins,MRPs)是线粒体核糖体主要组成
部分,维持线粒体行使正常功能和完成必须的生命活动。研究表明,MRPs的异常表达
会导致线粒体代谢失调、细胞生命活动出现障碍等。线粒体核糖体蛋白31(MRPS31)
是MRPs成员之一,位于线粒体核糖体28S小亚基上,参与组装线粒体核糖体并翻译由
mtDNA编码的氧化呼吸链上的13种蛋白质。近年来,研究人员致力于MRPs在肿瘤方
面的研究,包括在肝癌、甲状腺癌、结直肠癌中均发现MRPS31的异常表达,但在纤维
化领域中尚未见相关报道。
本课题旨在分析MRPS31在IPF发病机制中的作用,并探讨其在IPF中发挥生物学
功能的分子机制。首先,为了明确MRPS31在纤维化肺中的表达变化,我们构建了博来
霉素(Bleomycin,BLM)诱导的实验性肺纤维化小鼠模型,然后通过免疫组织化(IHC)
学和免疫荧光(IF)染色以及蛋白质免疫印迹技术初步确定了纤维化小鼠肺组织中
MRPS31的蛋白表达水平及其细胞定位。结果显示,小鼠模型中MRPS31的表达明显增
加,且免疫荧光共染色表明MPRS31主要定位在Ⅱ型肺泡上皮细胞(AEC2)中。接下
来,我们用BLM处理A549细胞,检测MRPS31在上皮细胞损伤模型中的表达变化。
结果显示,MRPS31在BLM处理下显著下调。因此,我们推测MRPS31可能在IPF中
发挥潜在作用。
为进一步探究MRPS31在肺纤维化中所发挥的生物学作用及其分子机制,接下来,
我们采取RNA干扰手段,在A549细胞中沉默MRPS31,并通过细胞划痕、Transwell、
WesternBlot等实验方法表明了沉默MRPS31明显促进了A549细胞的迁移能力和上皮
间质转化。随后,我们探究了干涉MRPS31对上皮细胞线粒体稳态的影响。结果显示,
在A549细胞中干涉MRPS31之后,线粒体分裂融合相关蛋白(MFN1/MFN2/OPA1/DRP1)
的表达出现异常,且线粒体介导的细胞凋亡相关蛋白(BAX/cleaved-caspase3)的表达
明显上调。进一步的结果显示,干涉MRPS31之后,不仅导致了线粒体膜电位的异常,
还增加了线粒体ROS的产生。此外,我们还发现在A549细胞中沉默MRPS31之后,
电子传递链复合物亚基2(MT-CO2)的水平出现了明显下调,表明线粒体内氧化磷酸
化过程的异常。为进一步阐明MRPS31对肺纤维化的影响,我们采用了上皮细胞A549
与成纤维细胞MRC-5共培养的方式。结果显示,在上皮细胞中干涉MRPS31之后,明
显促进了成纤维细胞的增殖与活化。以上结果提示MPRS31在维持上皮细胞线粒体稳态
和正常生命活动中具有重要作用。由于线粒体功能异常通常会导致细胞内各项代谢活动
出现障碍,因此我们进一步探究了MRPS31对上皮细胞脂代谢的影响。结果表明,沉默
MRPS31明显增加了上皮细胞中脂质的积累。进一步地,我们通过IF和免疫沉淀(IP)
实验发现,MRPS31和ACADSB(Acyl-CoADehydrogenaseShort/BranchedChain)存在
相互作用,且MRPS31的缺失导致了ACADSB表达水平的降低,这可能介导了细胞内
脂质积累的增多。
综上所述,我们发现MRPS31对维持Ⅱ型肺泡上皮细胞线粒体稳态具有关键作用,
MRPS31的缺失可导致线粒体功能异常,细胞代谢活动失调,进而导致细胞内脂质的积
累,且MPRS31可能通过与ACADSB相互作用从而介导细胞内的脂质稳态,维持细胞
的正常生命活动。总之,
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