MRPS31通过调节线粒体功能在肺纤维化中的作用及机制研究.pdf

摘要

特发性肺纤维化（IdiopathicPulmonaryFibrosis,IPF）是一种发病机制复杂的慢性、

进行性和死亡率极高的肺部疾病，其主要特征是过度沉积的基质导致肺泡结构的破坏和

功能的不可逆丧失。尽管近年来研究者们已经在其发病机制和临床治疗方面取得了一定

的进展，但这种毁灭性疾病目前仍然无法治愈，确诊后的中位生存期仅为3-5年，对人

类生命健康产生了极大威胁。

线粒体核糖体是一个55S复合体，由两个亚基组成，即39S大亚基和28S小亚基。

线粒体核糖体蛋白（mitochondrialribosomalproteins,MRPs）是线粒体核糖体主要组成

部分，维持线粒体行使正常功能和完成必须的生命活动。研究表明，MRPs的异常表达

会导致线粒体代谢失调、细胞生命活动出现障碍等。线粒体核糖体蛋白31（MRPS31）

是MRPs成员之一，位于线粒体核糖体28S小亚基上，参与组装线粒体核糖体并翻译由

mtDNA编码的氧化呼吸链上的13种蛋白质。近年来，研究人员致力于MRPs在肿瘤方

面的研究，包括在肝癌、甲状腺癌、结直肠癌中均发现MRPS31的异常表达，但在纤维

化领域中尚未见相关报道。

本课题旨在分析MRPS31在IPF发病机制中的作用，并探讨其在IPF中发挥生物学

功能的分子机制。首先，为了明确MRPS31在纤维化肺中的表达变化，我们构建了博来

霉素（Bleomycin,BLM）诱导的实验性肺纤维化小鼠模型，然后通过免疫组织化（IHC）

学和免疫荧光（IF）染色以及蛋白质免疫印迹技术初步确定了纤维化小鼠肺组织中

MRPS31的蛋白表达水平及其细胞定位。结果显示，小鼠模型中MRPS31的表达明显增

加，且免疫荧光共染色表明MPRS31主要定位在Ⅱ型肺泡上皮细胞（AEC2）中。接下

来，我们用BLM处理A549细胞，检测MRPS31在上皮细胞损伤模型中的表达变化。

结果显示，MRPS31在BLM处理下显著下调。因此，我们推测MRPS31可能在IPF中

发挥潜在作用。

为进一步探究MRPS31在肺纤维化中所发挥的生物学作用及其分子机制，接下来，

我们采取RNA干扰手段，在A549细胞中沉默MRPS31，并通过细胞划痕、Transwell、

WesternBlot等实验方法表明了沉默MRPS31明显促进了A549细胞的迁移能力和上皮

间质转化。随后，我们探究了干涉MRPS31对上皮细胞线粒体稳态的影响。结果显示，

在A549细胞中干涉MRPS31之后，线粒体分裂融合相关蛋白（MFN1/MFN2/OPA1/DRP1）

的表达出现异常，且线粒体介导的细胞凋亡相关蛋白（BAX/cleaved-caspase3）的表达

明显上调。进一步的结果显示，干涉MRPS31之后，不仅导致了线粒体膜电位的异常，

还增加了线粒体ROS的产生。此外，我们还发现在A549细胞中沉默MRPS31之后，

电子传递链复合物亚基2（MT-CO2）的水平出现了明显下调，表明线粒体内氧化磷酸

化过程的异常。为进一步阐明MRPS31对肺纤维化的影响，我们采用了上皮细胞A549

与成纤维细胞MRC-5共培养的方式。结果显示，在上皮细胞中干涉MRPS31之后，明

显促进了成纤维细胞的增殖与活化。以上结果提示MPRS31在维持上皮细胞线粒体稳态

和正常生命活动中具有重要作用。由于线粒体功能异常通常会导致细胞内各项代谢活动

出现障碍，因此我们进一步探究了MRPS31对上皮细胞脂代谢的影响。结果表明，沉默

MRPS31明显增加了上皮细胞中脂质的积累。进一步地，我们通过IF和免疫沉淀（IP）

实验发现，MRPS31和ACADSB（Acyl-CoADehydrogenaseShort/BranchedChain）存在

相互作用，且MRPS31的缺失导致了ACADSB表达水平的降低，这可能介导了细胞内

脂质积累的增多。

综上所述，我们发现MRPS31对维持Ⅱ型肺泡上皮细胞线粒体稳态具有关键作用，

MRPS31的缺失可导致线粒体功能异常，细胞代谢活动失调，进而导致细胞内脂质的积

累，且MPRS31可能通过与ACADSB相互作用从而介导细胞内的脂质稳态，维持细胞

的正常生命活动。总之，