3.1 重组DNA技术的基本工具（分层作业）（解析版）.docx

第1节重组DNA技术的基本工具

1．血浆中含有大量蛋白质和少量脂质等，血浆cfDNA与蛋白质紧密粘附结合，提取血浆cfDNA的步骤主要有：配制洗涤液→样本裂解→DNA析出→DNA吸附→杂质洗涤→DNA洗脱与收集。下列说法错误的是（????）

A．样本裂解的目的是裂解血细胞，使其含有的DNA释放

B．可以通过加入体积分数95%的预冷乙醇，轻轻颠倒混匀的方式析出DNA

C．洗涤液的作用是高效去除血浆中的蛋白质和脂质等

D．洗脱DNA的洗脱液中含有一定浓度的NaCI

【答案】A

【分析】血浆中的cfDNA（cell-freeDNA）是由身体各个组织的细胞凋亡后释放的片段化DNA混合物。

【详解】A、血浆不含有血细胞，裂解是使样品中的核酸游离在裂解体系中的过程，A错误；

B、DNA不溶于乙醇，细胞中某些蛋白质溶于乙醇，可以通过加入体积分数95%的预冷乙醇，轻轻颠倒混匀的方式析出DNA，B正确；

C、血浆中含有大量蛋白质和少量脂质等，洗涤液的作用是高效去除血浆中的蛋白质和脂质等，C正确；

D、DNA洗脱液的原理：在高盐状态下，硅胶膜专一性地吸附DNA；在低盐或水溶液状态下，DNA被洗脱下来，洗脱DNA的洗脱液中含有一定浓度的NaCI，D正确。

故选A。

2．致育因子又称F因子，是游离在大肠杆菌细胞质中的一种环状DNA，能指导性菌毛的合成，性菌毛形成连接相邻大肠杆菌间的通道。含致育因子的大肠杆菌（F+）借助通道将自身的遗传物质传递给不含致育因子的大肠杆菌（F－），继而完成细胞的暂时沟通和遗传物质转移，（F－）转化为（F+），过程如下图所示。下列相关叙述错误的是（）

A．F－转化为F+的过程中发生了基因重组

B．F+中的F因子仅有一条DNA链进入F－

C．完成转化过程的F－获取了F+中的大多数性状

D．F－转化为F+的转化过程需要内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶和解旋酶参与

【答案】C

【分析】DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．DNA连接酶和DNA聚合酶的区别：①DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核苷酸片段上，形成磷酸二酯键；②DNA连接酶是同时连接双链的切口，而DNA聚合酶只是在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来；③DNA连接酶不需要模板，而DNA聚合酶需要模板。

【详解】A、由图可知，F?转化为F?的过程中发生了基因重组，A正确；

B、由图可知，F?中的F因子仅有一条DNA链进入F?，然后在F?中完成复制过程，B正确；

C、完成转化过程的F?只获取了F?中的至育因子，C错误；

D、F?转化为F?的转化是DNA重组技术，其过程需要内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶和解旋酶参与，D正确。

故选C。

3．如图是碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA的简要步骤。下列说法错误的是（????）

AI

A．碱性试剂2可破坏大肠杆菌的细胞膜，从而释放细胞内容物

B．试剂3利用了拟核DNA与质粒DNA的长度差异，仅使前者沉淀

C．①步骤结束后应敞开管盖，待残余酒精完全挥发后再进行②步骤

D．可用任意浓度的NaCl溶液替换②步骤所用的水，以溶解质粒DNA

【答案】D

【分析】DNA粗提取和鉴定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精；DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性。（2）DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。

【详解】A、细胞膜主要由脂质和蛋白质构成，碱性试剂可导致蛋白质变性而破坏细胞膜，A正确；

B、拟核中的DNA较大，试剂3处理后在沉淀中，B正确；

C、①步骤利用了DNA不溶解于酒精中的原理，结束后应敞开管盖，待残余酒精完全挥发后再进行②步骤，可提取到质粒DNA，C正确；

D、DNA在不同浓度的氯化钠中溶解度不同，在高浓度的氯化钠中溶解度高，在特定浓度中处于析出状态，需利用2mol/L的氯化钠提取，不能用0.15mol/L的提取，D错误。

故选D。

4．DNA琼脂糖凝胶电泳是指利用在溶液中带负电荷的DNA分子在电场中向正极移动的原理，分离、纯化或分析PCR扩增后的待检DNA片段的生物化学技术。下列说法错误的是（????）

A．DNA片段相对分子质量越大，迁移就越慢

B．凝胶制备中加入的核酸染料能与DNA分子结合，用于分离后DNA片段的检测

C．拟回收的DNA区带融化后可先用DNA抽取剂抽提，再用70％的冷乙醇沉淀抽提DNA片段，从而提高回收率

D．新冠病毒核酸检测出现假阳性的原因可能是阳性对照中模板核酸与样品交叉污染

【答案】C

【分析】1、PCR技术是把某一DNA片段在酶的作用下，在体外合成许多相同片段的一种方法，