科技论文写作第三讲.pptVIP

水稻多小花小穗突变体mf1的鉴定与基因定位1材料与方法1.1材料mf1是一个天然的水稻花器官突变体,来源于杂交育种中间材料,经多代自交,遗传稳定。将mf1与12个恢复系杂交,F1和F2用于遗传分析。以IR24×mf1的F2群体为初步定位群体,以IR24×mf1的F3代分离群体为精细定位群体。1.2形态和组织学分析选取抽穗期的突变体和野生型小穗,在尼康SM1500体视镜下观察照像分析。参照Xiao等的方法[13],选取抽穗期的野生型和突变体小穗于FAA(50%无水乙醇,0.9molL-1的冰乙酸和3.7%甲醛)中4℃固定16h以上,经乙醇梯度脱水和二甲苯透明后用石蜡包埋。切片厚度为10μm,经1%番红和1%快绿对染后于尼康E600光学显微镜下观察照像分析。1.3基因定位采用BSA法定位目标基因[14]，即根据F2植株表型，分别选取10株正常单株和10株突变单株，剪取等量叶片，构成正常基因池和突变基因池。按CTAB法提取亲本和基因池DNA[15]，按碱煮法提取群体DNA[16]。SSR引物序列参照http:///，由上海生工生物技术公司合成。PCR总体系为25μL，含2.5μL10×PCRbuffer、1.3μL25mmolL-1MgC12、1.0μL2.5mmolL-1dNTPs、16.0μLddH2O、2.0μL10μmolL-1引物、2.0μL模板DNA、0.2μL5UμL-1Taq酶。PCR程序为，94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃复性1min，35个循环；72℃延伸10min。PCR产物经10%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,快速银染后观察[16-17]。1.4图谱构建将具有mf1突变亲本带型的单株记为B，具有正常亲本IR24带型的单株记为A，具有杂合带型的单株记为H，用软件MMQTX18计算遗传距离并构建遗传图谱。根据gramene网站提供的水稻序列信息构建物理图谱。材料植物材料：mf1突变体、12个恢复系、mf1突变体与恢复系杂交的F1和F2仪器：尼康SM1500体视镜、尼康E600光学显微镜切片机、PCR仪、电泳仪等试剂：无水乙醇、冰乙酸和、甲醛、二甲苯、番红、快绿、PCR试剂DNA提取、电泳等相关试剂方法实验：石蜡切片、DNA提取、PCR、电泳观察指标：形态学和组织学的观察（体视镜、光镜）F2群体分离情况SSR分析的带型统计：遗传分析、软件MMQTX18计算遗传距离单独的试剂描述L-茶氨酸通过乙酰胆碱受体多巴胺奖赏通路抑制尼古丁依赖1.1试剂改进的DulbeccoEagle’s(DMEM)高糖培养基购自GIBCO(GrandIsland,NY,USA);胎牛血清(FBS)购自Hyclone(logan,UT,USA);2-NBDG购自InvitrogenCo.(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA);胰酶,青霉素,链霉素,EDTA(ethylenediaminotetraaceticacid),β-羟基刺桐定溴酸盐(DHβE)等购自SigmaChemicalCo.(St.Louis,MO,USA);L-茶氨酸由杭州禾田生物技术有限公司馈赠,纯度为98.11%(HPLC分析);尼古丁由郑州烟草研究院提供;乙酰胆碱受体AChR4(sc-74519),AChR2(sc-11372),AChR7(sc-11372),TH(sc-25269),c-FOS(sc-52)和Actin(sc-1616-R)抗体购自SantaCruzBiotechnology(SantaCruz,CA,USA);VectastainABC和DAB试剂盒购自VECTORCorporation(Brulingame,USA).其余化学试剂均为国产分析纯.材料与分组处理一起描述L-茶氨酸通过乙酰胆碱受体多巴胺奖赏通路抑制尼古丁依赖1.2实验动物和处理6~8周雌性C57BL/6J小鼠购自中国医学科学院实验动物中心,饲养于无特定病原体级SPF(specif