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哈尔滨工业大学理学硕士学位论文
摘要
间充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSCs）是一种具有多向分化和自
我更新能力的基质细胞。有大量研究发现，间充质干细胞的旁分泌功能是其发
mesenchymalstem
挥治疗作用的重要特性，主要由间充质干细胞衍生的外泌体（
cell-exosomesMSC-exoexosomesEXOs
，）介导细胞间通讯来实现的。外泌体（，）
30-150nmumbilical
是一种细胞外囊泡，直径。脐带间充质干细胞来源的外泌体（
cordmesenchymalstemcell-exosomes，UCMSC-exo）治疗组织疾病具有稳定性
高、无需增殖、便于定量使用等优势，具有较高的安全性。但由于间充质干细
胞外泌体的产量低、靶向性弱、纯度低等问题限制了其临床应用。在外泌体的
临床应用中，一个关键的技术挑战是迫切需要通过细胞培养（在几天内）获得
pulsedelectromagneticfieldsPEMFs
足够数量的外泌体。脉冲电磁场（，）技术
是一种新兴的非电离，不产热，非接触的物理治疗手段，具有修复受损组织，
促进组织再生等作用。脉冲电磁场由脉冲电流供电，磁场的强度不变，由间歇
振荡器控制间隔产生，其建立起随时间变化的电场，能够产生磁场和电场双重
作用，促进外泌体的合成释放。
本研究选择人脐带间充质干细胞作为外泌体的来源。首先完成人脐带间充
质干细胞的培养及鉴定。收集无血清培养的细胞上清液用于脐带间充质干细胞
外泌体的提取和鉴定。通过倒置相差显微镜，透射电镜，动态光散射激光粒度
与电位分析仪对实验所用的脐带间充质干细胞和通过差速超离法分离得到的细
胞外泌体进行表征。
研究设计几种不同的脉冲磁诱导条件，在多个磁诱导方式，多个磁场强度，
多个磁场频率下对脐带间充质干细胞进行磁诱导刺激，收集细胞培养基提取外
泌体，测试外泌体数量，分析外泌体产率，筛选出外泌体产率最高的一组磁诱
导条件用于后续研究。同时，对磁诱导时间进行实验比较，筛选出外泌体产率
最高的一组磁诱导时间用于后续研究。综合得到脐带间充质干细胞外泌体产率
最高的新型细胞空间磁诱导微环境（4D-spacemagneticinduction
microenvironment4D-SMIM
，）研究体系。
进一步探究细胞空间磁诱导微环境对脐带间充质干细胞外泌体合成释放
的影响，通过免疫印迹技术检测脐带间充质干细胞外泌体相关蛋白的表达。探
究脐带间充质干细胞在不同温度下的细胞活力，横向比较细胞空间磁诱导微环
--I
哈尔滨工业大学理学硕士学位论文
境与其他增加外泌体产率的技术方法对细胞活力的影响。分析细胞空间磁诱导
微环境对脐带间充质干细胞钙离子浓度的影响，以及脐带间充质干细胞钙离子
浓度与细胞外泌体产率之间的关系。分析细胞空间磁诱导微环境对脐带间充质
干细胞热休克蛋白表达的影响，以及脐带间充质干细胞热休克蛋白表达与细胞
外泌体产率之间的关系。探究细胞空间磁诱导微环境对脐带间充质干细胞外泌
体合成释放的影响，初步探究细胞空间磁诱导微环境对脐带间充质干细胞的诱
导刺激机制。
本研究构建一种新型细胞空间磁诱导微环境研究体系，物理性调控间充质
干细胞外泌体的合成和释放。初步探究脉冲磁诱导技术诱导间充质干细胞外泌
体合成释放的效应规律，为间充质干细胞外泌体的临床治疗策略提供新的思路
和方法
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