质谱发展历史-基础知识.ppt

A、串联四极杆（三级四极杆）

triple-QuadrupoleAnalyzerQ?为过滤单元Q?为碰撞单元Q?为分析单元空间串联质谱仪MS方式：所有离子通过Q?Q?Q?到达检测器。MS/MS方式：Q?作为分析器选择母离子(前体离子），Q?作为碰撞室产生子离子，子离子由Q?分析。MS3方式：几种检测方式三级四极杆的几种扫描模式1、子离子扫描模式：即MS/MS。2、前体离子扫描模式：Q?依次将所有离子输入Q?碰撞解离，Q?设定一个特定子离子值，只检测此特定子离子，Q?与Q?联接，当检测器检测到子离子时，质谱仪记录的是Q?中的子离子值，质谱图显示的是所有产生相同子离子的母离子。3、中性丢失扫描：Q?扫描与Q?有一特定质量差异的子离子，谱图显示的是所有特定中性分子丢失的母离子。三级四极杆飞行时间质谱仪

Quadrupoletimeofflight飞行时间飞行时间质谱仪Time-of-flight/time-of-flight时间串联质谱仪A、离子阱质谱仪：B、傅立叶回旋共振质谱仪

Fouriertransform-ioncyclotronresonance离子进入共振腔后，通过调控RF，选择特定的母离子留在腔内，再引入惰性碰撞气体碰撞,产生碎片,并检测碎片离子，这一过程不断重复至MS?。几种串联质谱优缺点对比优点缺点三级四极杆质量精度高，分辨率好碰撞能量低，碎片不完全。RTOF价廉前体离子选择困难子离子分辨率低。FTMS质量精度最高，子离子分辨率好，非常适合多级质谱低能量碰撞，需超导磁体，价高。离子阱相对价廉，质量精度高，分辨率好，适合多级质谱低能量碰撞Q－TOF质量精度高，分辨率好，前体离子选择性好，ESI、MALDI均可接。需高真空，价高。第四章检测器电子倍增检测器：真空度低，表面易污染，寿命一般1－2年。二、光电转换倍增器（闪烁计数器）电子发射撞击荧光屏，荧光屏发射光子由光子放大器检测。光子放大器密封在容器中，光子可穿过密封玻璃，避免表面污染，寿命为5年。三、HED

(High-EnergyDynodeDetector)在离子倍增器前加一个加速静电场，离子加速后产生更多的二级电子引发电子雪崩，灵敏度更高。四、FT-MSFT-MS本身就是一个检测器，因为离子诱导产生的可检测电流与m/z有关。01肽质量指纹谱鉴定蛋白。02串联质谱鉴定蛋白技术第五章、质谱在生物学中的应用ThenomenclatureofthecommonpeptidefragmentionsdevelopedbyRoepstorffandFohlmanlogoTheproposedmechanismofformationofbandy-typeions三、肽序列标签技术通过测部分氨基酸序列，结合此序列前后的离子质量和肽段母离子质量进行数据库检索，称为肽序列标签技术。四、O标记从头测序技术蛋白酶解时，酶解液中H2O和H2O各占50％，酶解后肽段的羧基端上的羟基氧O/O丰度比1：1，使Y型离子系列的M+2/M同位素峰的丰度高于正常未标记O的离子的同位素丰度比。18181618161801A：MAＬＤＩ－ＴＯＦ结合磷酸酶水解02磷酸化蛋白03MS04蛋白酶水解05MS06磷酸酶脱HPO307MS08通过比较几级质谱图，比较质量数少80Da或80倍数的肽段。五、磷酸化蛋白质的鉴定B、串联质谱进行母离子、中性丢失扫描，分析含HPO3的肽段产生的特征离子，直接从混合肽段中找出磷酸化肽段。用源后衰变技术寻找质量数少80Da或98Da的肽段来判断磷酸肽。02C、PRD-MALDI-MS01D、用IMAC技术分离/富集磷酸肽对比前后质谱变化寻找磷酸肽。01IMACimmobilizedmetalaffinity固相金属亲和色谱。

IMAC对磷酸肽有高选择结合能力，富集后用高PH或磷酸盐洗脱后测质谱

。02E、磷酸化位点的确定找到磷酸肽后，串联质谱子离子扫描模式对磷酸肽进行序列分析。F、磷酸化定量分析14N培养基N稳定同位素标记法：N培养基2、同位素亲和标记法细胞池1细胞池2混合β消除＋氘Β消除＋氢亲和纯化酶解MS磷酸肽或磷酸化蛋白在缄性环境下发生β消除，同时用亲核试剂攻击形成的双键并发生加成反应，亲核试剂一种为氘原子、一种为氢原子，再接上一个亲和标签（如生物素biotin），混合酶解，提取含biotin的